[发明专利]一种碳量子点荧光免疫法快速检测丙烯酰胺的方法

摘要

本发明属于荧光法快速检测技术领域，具体一种碳量子点荧光免疫法快速检测丙烯酰胺的方法；具体步骤为：首先合成碳量子点，然后将功能化修饰适于生物标记的纳米材料碳量子点与丙烯酰胺特异性抗体结合，制备碳量子点标记丙烯酰胺抗体，得到高效的量子点‑抗体偶联复合物作为检测荧光探针，建立一种快速简便的荧光免疫分析方法应用在食品生产加工过程中丙烯酰胺的检测，为食品安全提供有效保障；本发明利用富含碳元素的前体物质柠檬酸合成碳量子点，来源广泛、成本低廉，安全环保；本发明提供的检测方法是基于酶联免疫法抗原抗体的特异性结合的原理检测丙烯酰胺，特异性较强，灵敏度较高，相比传统的酶联免疫法，检测时间缩短，检测效率提高。

主权项

1.一种碳量子点荧光免疫法快速检测丙烯酰胺的方法，其特征在于，步骤如下：(1)合成碳量子点溶液；(2)取步骤(1)中得到的碳量子点溶液加入到的碳酸氢钠缓冲液中，搅拌，加入戊二醛溶液，搅拌，再加入的丙烯酰胺特异性抗体溶液，得到混合溶液，转移至冰浴中反应；然后加入硼氢化钠溶液，在冰浴条件下进行搅拌，然后于一定条件下静置后，再用磷酸盐缓冲液透析，得到碳量子点标记丙烯酰胺抗体溶液；(3)荧光免疫法检测丙烯酰胺；S1：取丙烯酰胺半抗原与鸡卵清蛋白混合反应，得到包被原溶液，然后用碳酸盐缓冲液将包被原溶液稀释至一定浓度，得到包被原溶液稀释液，然后加入96孔黑色荧光酶标板的孔中，静置；S2：将吐温20和磷酸盐缓冲液混合配置洗涤液，然后将洗涤液加入酶标仪全自动洗板机中，把S1中得到的96孔黑色荧光酶标板放在酶标仪全自动洗板机下重复洗板，洗板后将96孔黑色荧光酶标板孔中的溶液吸干；S3：将牛血清白蛋白溶解在磷酸盐缓冲液中配置溶液，得到封闭液，将封闭液加入到S2处理后的96孔黑色荧光酶标板孔中，于一定条件下进行静置，然后再次用酶标仪全自动洗板机进行洗板；S4：在经过S3处理后的96孔黑色荧光酶标板中的孔中加入丙烯酰胺半抗原溶液和步骤(2)得到的碳量子点标记丙烯酰胺抗体溶液，于一定条件下进行竞争反应，得到竞争溶液；在一定的激发波长和发射波长条件下，测定96孔黑色荧光酶标板各孔中竞争溶液的荧光强度；S5：分别以丙烯酰胺半抗原的的浓度为横坐标，以步骤S4得到的荧光强度的比值为纵坐标，建立荧光酶联免疫法检测丙烯酰胺的标准曲线；进而实现对待测样品中丙烯酰胺含量的检测。