[发明专利]一种采用免标记银纳米簇分子信标的方法痕量检测ATP

摘要

本发明公开了一种免标记银纳米簇分子信标的方法痕量检测ATP。一种检测ATP的荧光生物传感器，它涉及荧光生物传感器的制备方法，用途及检测方法。本发明的目的是：构建并制备一种新型的可用于检测ATP的荧光生物传感器，将银纳米簇材料与DNA T4连接酶相结合，通过对显著下降的荧光强度的检测实现对ATP的痕量检测。

主权项

1. 用于免标记检测的多功能银纳米簇分子信标的设计与合成的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：（1）制备双链DNA模板：①将单链DNA AA(浓度为10µM～100µM)与50µL 100mmol L^‑1 的Tris缓冲溶液（PH7.6）混合，在25^OC下反应10min；②将单链DNAC1（浓度为10µM～100µM）和DNAC2（浓度为10µM～100µM）分别加入到该体系中；在25^OC下反应10min；③然后，将DNA T4连接酶（5U）1uL、不同浓度的10µL ATP、分别加入到该体系中；在37^OC下反应20min；（2）合成DNA‑Ag纳米簇①将50µL 的Tris缓冲溶液（PH7.6）(100mmol L^‑1～150mmol L^‑1)加入到上述双链DNA溶液中；②经过振动搅拌后，将10µL AgNO₃溶液(浓度为40µM～200µM)、10µLN_aBH₄(浓度为40µM～200µM)加入到混合溶液中，该混合溶液在25^OC下震荡6h，荧光Ag纳米簇形成；（3）根据上述步骤，进行ATP检测；（4）绘制标准曲线：首先将10µL DNA1分别加入到编号为a到j的10个小管中，其中，a号不加ATP溶液，b号加入0.01µM ATP溶液，c号加入0.05µM ATP溶液，d号加入0.1µM ATP溶液，e号加入0.5µM ATP溶液，f号加入2µM ATP溶液，g号加入4µM ATP溶液，h号加入6µM ATP溶液，i号加入8µM ATP溶液，j号加入10µM ATP溶液，其次分别向编号为a到j的混合溶液中加入50µL 100mmol L^‑1 的Tris缓冲溶液（PH 7.6），将此混合溶液放在37^OC的水浴震荡中避光反应20min；然后分别将编号为a到j的混合溶液中加入10µLAgNO₃溶液、10µLN_aBH₄得到编号为a到j的待测液；用1ml比色皿，编号为a不加ATP溶液的作为空白参比，测定590nm处编号为a到j的待测液的荧光强度；其中，从编号为a到j，以ATP浓度为纵坐标，以体系的荧光强度为横坐标，可以绘制出标准曲线。