[发明专利]一种基于多巴胺脱羧酶催化产多巴胺的方法在审
| 申请号： | 201910257075.0 | 申请日： | 2019-04-01 |
| 公开（公告）号： | CN109943582A | 公开（公告）日： | 2019-06-28 |
| 发明（设计）人： | 陈可泉;程莎莎;高思远;陆秋豪;许晟;王昕;张阿磊;杨赛;李孟阳;欧阳平凯 | 申请（专利权）人： | 南京工业大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N1/21;C12P13/00;C12R1/19 |
| 代理公司： | 南京先科专利代理事务所(普通合伙) 32285 | 代理人： | 叶帅东 |
| 地址： | 210000 江苏省南京市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于多巴胺脱羧酶催化产多巴胺的方法，该方法具体包括以下步骤：构建表达多巴脱羧酶（DDC）的基因工程菌BL21（DE3）/pET28a‑DDC；培养基因工程菌BL21（DE3）/pET28a‑DDC并诱导表达DDC；收集上述菌体，用缓冲液重悬菌体后，超声破碎，离心去除杂质，得DDC的粗酶液；以多巴为底物，加入0.1‑1mM磷酸吡哆醛后调节反应体系的pH，加入DDC粗酶液反应得产物多巴胺。本发明方法是首次系统的做出从多巴到多巴胺的酶催化生产工艺，催化效率高达7.4g/l，转化率高达95％以上，环境友好，原料易得，生产成本低，工艺简单，反应条件温和，具有很好的工业化生产前景。 | ||
| 搜索关键词： | 多巴胺 基因工程菌 粗酶液 脱羧酶 多巴 菌体 催化 调节反应体系 离心去除杂质 多巴脱羧酶 反应得产物 磷酸吡哆醛 生产成本低 超声破碎 催化效率 反应条件 环境友好 缓冲液重 诱导表达 酶催化 底物 构建 生产工艺 | ||
【主权项】：
1.一种基于多巴胺脱羧酶催化产多巴胺的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，构建表达多巴脱羧酶的基因工程菌BL21（DE3）/pET28a‑DDC；步骤2，培养多巴脱羧酶的基因工程菌BL21（DE3）/pET28a‑DDC；步骤3，收集步骤2中的基因工程菌，用pH5‑9的缓冲液重悬后，超声破碎仪破碎；离心去除杂质，得到多巴脱羧酶的粗酶液；步骤4，选取多巴作为底物，加入0.1‑1mM磷酸吡哆醛，再添加缓冲溶液调节反应体系的pH至5‑9，最后加入多巴脱羧酶粗酶液0.5‑2g/l，40‑45℃反应0.5h‑3h，得到产物多巴胺，反应体系中底物多巴的终浓度不超过6g/l。
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