[发明专利]转基因玉米品系DAS40278-9检测方法和试剂

摘要

本申请公开了一种转基因玉米品系DAS40278‑9检测方法和试剂。本申请的检测方法，包括在PCR反应体系中同时加入玉米品系DAS40278‑9外源基因和HMG基因的特异引物和探针，并加入矿物油，混匀制成微滴，在微滴中进行双重ddPCR，反应结束后，读取每个微滴扩增信号，计算品系外源基因和HMG的拷贝数；其中，品系外源基因和HMG基因的探针分别用FAM和HEX标记。本申请检测方法，设计配套使用的内源基因HMG和品系特异性引物探针，采用双通道法，分别定量两者在玉米基因组的拷贝数，计算转基因玉米品系DAS40278‑9绝对含量，对玉米转基因成分研究和进出境玉米产品转基因成分精准定量检测有重要意义。

主权项

1.一种转基因玉米品系DAS40278‑9的检测方法，其特征在于：包括以下步骤，PCR扩增体系配制步骤，包括将品系DAS40278‑9特异引物组、品系DAS40278‑9特异探针、HMG基因特异引物组、HMG基因特异探针和待测样品的DNA加入到PCR反应液中，制成双重PCR反应体系；微滴生成步骤，包括在双重PCR反应体系中加入微滴生成油，混匀后，将其转移到微滴生成仪上，震荡生成微滴；PCR反应和微滴分析步骤，包括将微滴转移到反应管中进行PCR反应，PCR反应结束后，采用微滴分析仪读取每个微滴的扩增信号；定量检测步骤，根据读取的扩增信号，采用软件分析品系DAS40278‑9的特异扩增拷贝数占内源参考基因HMG基因特异扩增拷贝数的百分比，以此表示转基因玉米品系DAS40278‑9的含量；所述品系DAS40278‑9特异引物组的正向引物为Seq ID No.1所示序列，品系DAS40278‑9特异引物组的反向引物为Seq ID No.2所示序列，所述品系DAS40278‑9特异探针为Seq ID No.3所示序列，所述HMG基因特异引物组的正向引物为Seq ID No.4所示序列，HMG基因特异引物组的反向引物为Seq ID No.5所示序列，所述HMG基因特异探针为Seq ID No.6所示序列；Seq ID No.1：5’‑CACGAACCATTGAGTTACAATC‑3’Seq ID No.2：5’‑TGGTTCATTGTATTCTGGCTTTG‑3’Seq ID No.3：5’‑CGTAGCTAACCTTCATTGTATTCCG‑3’Seq ID No.4：5’‑TTGGACTAGAAATCTCGTGCTGA‑3’Seq ID No.5：5’‑GCTACATAGGGAGCCTTGTCCT‑3’Seq ID No.6：5’‑CAATCCACACAAACGCACGCGTA‑3’其中，Seq ID No.3所示序列的品系DAS40278‑9特异探针中，5’末端具有荧光基团，3’末端具有淬灭基团；Seq ID No.6所示序列的HMG基因特异探针中，5’末端具有荧光基团，3’末端具有淬灭基团。