[发明专利]一种DHBV DNA聚合酶提取及活性检测的新方法

摘要

本发明公开一种DHBV DNA聚合酶活性检测的新方法。其主要特征在于：Oligo(dT)15包被板的制备和DHBV聚合酶活性检测步骤。本发明DHBV聚合酶的活性测定方法的稳定性和重现性比较好，解决了在HBV DNA聚合酶的活性研究方面无法有效开展相关工作两大难题：(1)不具备提取HBV DNA聚合酶的条件和方法；(2)没有适合的方法检测HBV DNA聚合酶活性。并用实际的应用案例证实了本发明的实用性。

主权项

1.一种DHBV DNA聚合酶提取方法，其特征在于：选取1～2日龄鸭子，腿静脉攻入含有DHBV的血清，使其感染DHBV；7日后取鸭肝，剪碎鸭肝，加入1:1体积的缓冲液Ⅰ，进行肝匀浆；将肝匀浆离心后取上层，上层再重新离心，取上层合并；离心管中加入5ml 30％蔗糖的缓冲液Ⅰ垫底，将所得肝匀浆上层物超速离心，去掉上清，沉淀加1～2ml缓冲液Ⅱ，静置12小时；配置15％～50％等八个浓度的缓冲液Ⅰ，按浓度从高到低缓慢加入离心管中，此时液体分层，放入4℃冰箱中12小时；上层加上沉淀溶解物，低温超速离心后，按浓度梯度层逐层取出，每层再低温超速离心7小时，所得沉淀加入缓冲液Ⅱ溶解，取35％和40％部分合并超速离心，溶解后‑80℃保存，即得实验所需的DHBV DNA聚合酶。