[发明专利]一种生物组织透明化成像方法

摘要

本发明提供了一种生物组织透明化成像技术的改进及其应用，所述方法为CUBIC(Clear,Unobstructed Brain Imaging Cocktails and Computational Analysis)技术的改进，主要改进了CUBIC光透明技术的透明化效率以及GFP荧光的保持；该方法命名为f‑CUBIC(fast fluorescent‑CUBIC)。处理方法是向光透明试剂CUBIC‑L中加入胰脂酶lipase，以增加CUBIC‑L的脱脂能力，提高透明化的效率，另外，用NaOH调节折射率匹配试剂CUBIC‑R的pH值，提高透明化组织对GFP荧光信号的保持。本专利技术的试剂易于购买，价格便宜，操作简便，特别适合于对透明化困难的高脂含量组织的处理，如肝脏、脾脏等，且透明化时间短，荧光保持效果好，适用于多色光透明化荧光成像，提升了样本的荧光成像质量，扩大了样本的适用范围。

主权项

1.一种生物组织透明化成像方法，步骤包括：S1、称取100‑500U/mg的胰脂酶粉末溶解到CUBIC‑L试剂中，使胰脂酶含量为4‑100U/mL，得到CUBIC‑L试剂A；S2、将离体组织在PFA溶液内浸泡，固定完成后清洗；S3、将步骤S1所得试剂稀释一倍得到CUBIC‑L试剂B；S4、先采用CUBIC‑L试剂B对步骤S2所得离体组织进行摇床孵育，再采用CUBIC‑L试剂A对离体组织进行摇床孵育，定期换液直到离体组织透明；S5、清洗步骤S4所得透明组织，用稀释后的CUBIC‑R试剂对透明组织进行摇床孵育，孵育好的组织用CUBIC‑R试剂进行折射率匹配。