[发明专利]一种山羊痘病毒p32可溶性蛋白的制备方法在审
申请号: | 201910278888.8 | 申请日: | 2019-04-09 |
公开(公告)号: | CN109957575A | 公开(公告)日: | 2019-07-02 |
发明(设计)人: | 叶建强;金甫;王伟康;胡高伟;谢泉;邵红霞;秦爱建 | 申请(专利权)人: | 扬州大学 |
主分类号: | C12N15/70 | 分类号: | C12N15/70;C12N15/66;C12N15/62 |
代理公司: | 扬州苏中专利事务所(普通合伙) 32222 | 代理人: | 沈志海 |
地址: | 225009 *** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | 本发明涉及一种山羊痘病毒p32可溶性蛋白的制备方法,利用双酶切获得pGEX‑6p‑1线性化载体以及通过设计扩增山羊痘病毒p32基因片段的引物,利用T4连接酶连接,直接在体外快速重组,获得重组质粒pGEX‑6p‑1‑P32,并将其转化至大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导表达、实现山羊痘病毒的p32蛋白与GST的融合可溶性表达,并获得纯化的可溶性蛋白GST‑P32;本发明设计的引物及基于T4连接酶的克隆策略,可快速构建山羊痘病毒p32基因的原核可溶性表达载体。本发明获得的山羊痘病毒p32可溶性表达及纯化的蛋白,可直接提供p32可溶性蛋白作为山羊痘病毒诊断抗原;作为免疫原获得抗p32蛋白多克隆抗体;为开展山羊痘病毒流行病学调查提供有效诊断试剂;并为进一步探究p32蛋白的生物学功能具有重要意义。 | ||
搜索关键词: | 山羊痘病毒 可溶性蛋白 蛋白 可溶性表达 引物 制备 可溶性表达载体 流行病学调查 大肠杆菌 多克隆抗体 生物学功能 线性化载体 快速构建 有效诊断 诊断抗原 直接提供 重要意义 重组质粒 免疫原 双酶切 扩增 体外 原核 克隆 融合 转化 | ||
【主权项】:
1.一种山羊痘病毒p32可溶性蛋白的制备方法,其特征在于,包括以下步骤 :1)利用双酶切获得pGEX‑6p‑1线性化载体,通过BamH1与Xho1酶切获得带有相应酶切位点的线性化载体pGEX‑6p‑1;2)通过设计扩增山羊痘病毒p32基因片段的引物,利用下述引物,以pUC57‑GTPV P32质粒为模板,PCR扩增出带有BamH1与Xho1酶切位点的p32基因,并进行BamH1与Xho1酶切;上游引物 :5’‑CGCGGATCCATGGCAGATATCCCATTATATG‑3’;下游引物 :5’‑CCGCTCGAGCTAAACTATATACGTAAATAAC‑3’;3)利用T4连接酶对步骤1)和2)得到的线性化载体pGEX‑6p‑1以及BamH1与Xho1酶切的PCR产物在体外进行连接,直接在体外快速重组,获得重组质粒pGEX‑6p‑1‑P32,并将其转化至大肠杆菌BL21中,阳性克隆经IPTG诱导表达,实现山羊痘病毒的p32蛋白与GST的融合可溶性表达,并获得纯化的山羊痘病毒p32可溶性蛋白。
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