[发明专利]一种山羊痘病毒p32可溶性蛋白的制备方法在审

专利信息
申请号: 201910278888.8 申请日: 2019-04-09
公开(公告)号: CN109957575A 公开(公告)日: 2019-07-02
发明(设计)人: 叶建强;金甫;王伟康;胡高伟;谢泉;邵红霞;秦爱建 申请(专利权)人: 扬州大学
主分类号: C12N15/70 分类号: C12N15/70;C12N15/66;C12N15/62
代理公司: 扬州苏中专利事务所(普通合伙) 32222 代理人: 沈志海
地址: 225009 *** 国省代码: 江苏;32
权利要求书: 查看更多 说明书: 查看更多
摘要: 发明涉及一种山羊痘病毒p32可溶性蛋白的制备方法,利用双酶切获得pGEX‑6p‑1线性化载体以及通过设计扩增山羊痘病毒p32基因片段的引物,利用T4连接酶连接,直接在体外快速重组,获得重组质粒pGEX‑6p‑1‑P32,并将其转化至大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导表达、实现山羊痘病毒的p32蛋白与GST的融合可溶性表达,并获得纯化的可溶性蛋白GST‑P32;本发明设计的引物及基于T4连接酶的克隆策略,可快速构建山羊痘病毒p32基因的原核可溶性表达载体。本发明获得的山羊痘病毒p32可溶性表达及纯化的蛋白,可直接提供p32可溶性蛋白作为山羊痘病毒诊断抗原;作为免疫原获得抗p32蛋白多克隆抗体;为开展山羊痘病毒流行病学调查提供有效诊断试剂;并为进一步探究p32蛋白的生物学功能具有重要意义。
搜索关键词: 山羊痘病毒 可溶性蛋白 蛋白 可溶性表达 引物 制备 可溶性表达载体 流行病学调查 大肠杆菌 多克隆抗体 生物学功能 线性化载体 快速构建 有效诊断 诊断抗原 直接提供 重要意义 重组质粒 免疫原 双酶切 扩增 体外 原核 克隆 融合 转化
【主权项】:
1.一种山羊痘病毒p32可溶性蛋白的制备方法,其特征在于,包括以下步骤 :1)利用双酶切获得pGEX‑6p‑1线性化载体,通过BamH1与Xho1酶切获得带有相应酶切位点的线性化载体pGEX‑6p‑1;2)通过设计扩增山羊痘病毒p32基因片段的引物,利用下述引物,以pUC57‑GTPV P32质粒为模板,PCR扩增出带有BamH1与Xho1酶切位点的p32基因,并进行BamH1与Xho1酶切;上游引物 :5’‑CGCGGATCCATGGCAGATATCCCATTATATG‑3’;下游引物 :5’‑CCGCTCGAGCTAAACTATATACGTAAATAAC‑3’;3)利用T4连接酶对步骤1)和2)得到的线性化载体pGEX‑6p‑1以及BamH1与Xho1酶切的PCR产物在体外进行连接,直接在体外快速重组,获得重组质粒pGEX‑6p‑1‑P32,并将其转化至大肠杆菌BL21中,阳性克隆经IPTG诱导表达,实现山羊痘病毒的p32蛋白与GST的融合可溶性表达,并获得纯化的山羊痘病毒p32可溶性蛋白。
下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。

该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于扬州大学,未经扬州大学许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服

本文链接:http://www.vipzhuanli.com/patent/201910278888.8/,转载请声明来源钻瓜专利网。

×

专利文献下载

说明:

1、专利原文基于中国国家知识产权局专利说明书;

2、支持发明专利 、实用新型专利、外观设计专利(升级中);

3、专利数据每周两次同步更新,支持Adobe PDF格式;

4、内容包括专利技术的结构示意图流程工艺图技术构造图

5、已全新升级为极速版,下载速度显著提升!欢迎使用!

请您登陆后,进行下载,点击【登陆】 【注册】

关于我们 寻求报道 投稿须知 广告合作 版权声明 网站地图 友情链接 企业标识 联系我们

钻瓜专利网在线咨询

周一至周五 9:00-18:00

咨询在线客服咨询在线客服
tel code back_top