[发明专利]一株重组A型口蹄疫病毒VP1基因的粗糙型布鲁氏菌及其疫苗生产方法

摘要

本发明涉及一株重组A型口蹄疫病毒VP1基因的粗糙型布鲁氏菌的构建及其疫苗生产方法。本发明以粗糙型牛种布鲁氏菌弱毒株RA343株为亲本株，以蔗糖自杀质粒为载体，将含有特定启动子序列的A型口蹄疫病毒VP1基因经密码子优化后无痕插入到了布鲁氏菌基因组中，成功构建了能够高效表达型FMDV VP1基因的重组布鲁氏菌RA343‑VP1‑FMDV‑A株。该重组疫苗株不仅保留了原始亲本株RA343的粗糙型特性，对布鲁氏菌病(布病)良好的免疫保护性，而且该重组菌免疫动物后，能产生针对FMDV VP1抗体，从而实现对FMD的免疫保护。该重组疫苗株按特定工艺开发成具有耐热保护特点的新型疫苗，免疫动物后能同时实现对布病和口蹄疫的双重免疫保护。

主权项

1.一株重组A型口蹄疫病毒VP1基因的粗糙型布鲁氏菌疫苗，其特征在于该疫苗免疫动物后能同时实现对布病和A型口蹄疫的双重免疫保护，其生产菌株是一株含有能够高效表达A型口蹄疫病毒VP1基因的的重组粗糙型布鲁氏菌RA343‑VP1‑FMDV‑A株(简称布鲁氏菌RA343‑VP1‑FMDV‑A株)，该菌株是通过将P3启动子与VP1序列进行密码子优化，人工合成基因片段，并构建含有P3‑VP1(FMDV‑A)序列及布鲁氏菌上下游同源臂的蔗糖自杀质粒载体pUC/P3‑VP1+，将A型口蹄疫病毒VP1基因表达框部分无痕插入到布鲁氏菌基因组中，通过氨苄蔗糖双筛选筛选出阳性克隆，并进行传代培养，通过PCR及测序鉴定其稳定性，获得牛种布鲁氏菌(Bovine brucella)重组布鲁氏菌RA343‑VP1‑FMDV‑A株，并于2019年03月14日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为：CGMCC No.17332。