[发明专利]一株重组小反刍兽疫病毒H基因的粗糙型布鲁氏菌及其疫苗生产方法

摘要

本发明涉及一株重组小反刍兽疫病毒H基因的粗糙型布鲁氏菌的构建及其疫苗。本发明以粗糙型牛种布鲁氏菌弱毒株RA343株为亲本株，以蔗糖自杀质粒为载体，将含有特定启动子序列的小反刍兽疫病毒H基因经密码子优化后无痕插入到了布鲁氏菌基因组中，成功构建了能够高效表达型重组小反刍兽疫病毒H基因的重组布鲁氏菌RA343‑PPRV‑H株。该重组菌株不仅保留了原始亲本株RA343的粗糙型特性，对布鲁氏菌病(布病)良好的免疫保护性，而且该重组菌免疫动物后，能产生针对小反刍兽疫的特异性中和抗体，从而实现对小反刍兽疫的免疫保护。用该重组苗株制备的疫苗，免疫动物后能同时实现对布病和小反刍兽疫的双重免疫保护。

主权项

1.一种重组布鲁氏菌活疫苗，其特征在于该疫苗免疫动物后能同时实现对布鲁氏菌病和小反刍兽疫的双重免疫保护；其生产菌株是含有能够高效表达小反刍兽疫病毒H基因的重组布鲁氏菌RA343‑PPVR‑H株(本发明简称重组菌RA343‑PPRV‑H株)；该菌株是通过将P₃启动子与H基因序列进行密码子优化，人工合成基因片段，并构建含有P₃‑PPVR‑H序列及布鲁氏菌上下游同源臂的蔗糖自杀质粒载体pUC/P₃‑PPVR‑H⁺，将小反刍兽疫病毒H基因表达框部分无痕插入到布鲁氏菌基因组中，通过氨苄和蔗糖双重筛选，筛选出阳性克隆，并进行传代培养，通过PCR及测序鉴定其稳定性，获得重组布鲁氏菌(Bovine brucella)RA343‑PPVR‑H株，并已于2019年04月02日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为：CGMCC No.16860。