[发明专利]超高效液相色谱串联质谱测定血浆分子靶向药浓度的方法

摘要

本发明公开了一种超高效液相色谱串联质谱测定血浆分子靶向药浓度的方法，包括：分别采用乙腈溶解安罗替尼、色瑞替尼、依鲁替尼配制标准曲线工作液，采用甲醇溶解地西泮配制成内标物工作液；将0‑5μL标准曲线工作液分别加入空白血浆补足至50μL，涡旋制成标准曲线血浆样品，加入内标物工作液，涡旋，离心，取上清液，进行UPLC‑MS/MS定量分析，绘制标准曲线；精密吸取50μL的待测血浆，样本前处理方法同上，按照当批次的标准曲线测定安罗替尼、色瑞替尼、依鲁替尼浓度。本发明同时测定多种抗肿瘤分子靶向药物的血药浓度，灵敏度高、专属性强、快速、重现性好，适合用于临床高通量、同时检测和监测多种抗肿瘤分子靶向药物。

主权项

1.超高效液相色谱串联质谱测定血浆分子靶向药浓度的方法，其特征在于，包括：分别采用乙腈溶解安罗替尼、色瑞替尼、依鲁替尼配制多个浓度的标准曲线工作液，采用甲醇溶解地西泮内标物配制成内标物工作液；将0‑5μL安罗替尼、色瑞替尼、依鲁替尼多个浓度的标准曲线工作液分别加入空白血浆补足至50μL，涡旋制成多个浓度的标准曲线血浆样品，加入800‑1000μL内标物工作液，涡旋，0‑4℃下离心，取上清液，进行UPLC‑MS/MS定量分析，以血浆样品中安罗替尼、色瑞替尼、依鲁替尼浓度为横坐标，以安罗替尼、色瑞替尼、依鲁替尼峰面积与地西泮内标物峰面积的比值为纵坐标，绘制线性范围分别为0.1‑20ng/mL、2‑1000ng/mL、1‑500ng/mL的标准曲线；精密吸取50μL的待测血浆，加入绘制标准曲线时等量的内标物工作液，0‑4℃下离心，取上清液，进行UPLC‑MS/MS定量分析，在所述标准曲线上读取测得的安罗替尼、色瑞替尼、依鲁替尼峰面积与内标物峰面积的比值对应的安罗替尼、色瑞替尼、依鲁替尼浓度；液相条件为：色谱柱为Waters XBrige C18，内径2.1mm、柱长50mm、粒径3.5mm，流速0.5mL/min，进样体积2μL，分析时间5min，柱温为10‑30℃，洗针溶液为体积比为1:1:1:1的异丙醇、乙腈、甲醇和水的混合溶液，流动相的有机相为含有质量分数为0.2％的甲酸和5mM乙酸铵的甲醇，水相为含有质量分数为0.2％的甲酸和5mM乙酸铵的水，梯度洗脱设置为0‑1.2min、1.2‑3.2min、3.2‑3.5min、3.5‑5min有机相与水相的体积比分别为1:9、9:1、1:0、1:9；质谱条件为：采用电喷雾离子源的多反应监测模式，正离子扫描模式，多反应监测模式，安罗替尼的母、子离子对的质荷比为m/z 408.2→339.2、色瑞替尼的母、子离子对的质荷比为m/z 558.2→433.2、依鲁替尼的母、子离子对的质荷比为m/z 441.0→138.0、内标的母、子离子对的质荷比为m/z 285.0→193.1，每个多反应监测模式通道的扫描时间为100ms，质谱的离子化温度为650℃、气帘气25psi、雾化气和辅助气均为55psi、离子化电压为5500V、入口电压为10eV、碰撞室出口电压为30eV。