[发明专利]重组安克洛酶及工业规模制备和纯化方法及其组合物有效
| 申请号： | 201910286716.5 | 申请日： | 2019-04-10 |
| 公开（公告）号： | CN110016471B | 公开（公告）日： | 2020-10-02 |
| 发明（设计）人： | 孙雷;王增博 | 申请（专利权）人： | 北京博康宁生物医药科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/64 | 分类号： | C12N9/64;A61K38/48;A61K9/08;A61K9/00;A61K47/02;A61P9/10 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 102600 北京市大兴区生物*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 涉及重组安克洛酶及工业规模制备和纯化方法及其组合物。具体地，该重组安克洛酶具有说明书所示氨基酸序列单链，该安克洛酶是平均分子量39～41KDa、分子量范围33～52KDa、修饰糖含量19％的糖蛋白。还涉及该重组安克洛酶的制备和纯化，以及它们的注射液形式的组合物。本发明重组安克洛酶呈现与天然安克洛酶显著更优异的性能。本发明方法能够以工业生产规格获得高表达量的重组安克洛酶，产量能够达到每毫升发酵液200IU/ml以上，比活性能够达到1000IU/mg。本发明重组安克洛酶具有更复杂和更完整的糖基化水平，稳定性显著增强，解决了安克洛酶表达量低、产业化困难的问题。所得注射液组合物呈现优异药学性能。 | ||
| 搜索关键词： | 重组 安克洛酶 工业 规模 制备 纯化 方法 及其 组合 | ||
【主权项】：
1.纯化重组安克洛酶的方法，其包括在将得到的重组安克洛酶蛋白用反相液相色谱纯化后，采用如下方式进行Heparin Sepharose6 Fast Flow凝胶亲和柱层析纯化：层析柱，填料为Heparin Sepharose6 Fast Flow，样品为步骤(3)中的活性主峰，用PBS‑LYS缓冲液稀释至1000ml，上样，柱流速为2mL/min；上样后，用PBS‑LYS缓冲液平衡至基线，用PBS‑LYS缓冲液洗脱，收集活性组分；用PBS‑LYS缓冲液洗脱杂质组分，再用PBS‑LYS缓冲液冲洗层析柱1000ml，再生，备用，得到重组安克洛酶原液。
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