[发明专利]一种高效的茶树叶片蛋白质提取方法

摘要

本发明公开了一种高效的茶树叶片蛋白质提取方法，以新鲜茶树叶片，采用TCA/丙酮混合液进行提取，分离、静置，进一步对静置后的沉淀进行清洗纯化，低温真空冷冻干燥，获得粗蛋白，再采用裂解液裂解粗蛋白，离心取上清获得纯蛋白溶液。本发明有效提高了提取所获得的蛋白质数量，采用2D‑PAGE进行分离后，分离效果好，能有效将蛋白质分离，蛋白质点清晰；采用LC/MS/MS对蛋白质进行鉴定，结果表明，采用本发明方法提取的蛋白质数量在4117～4218个之间。本发明方法为茶树叶片蛋白质组学研究奠定了重要的基础。

主权项

1.一种高效的茶树叶片蛋白质提取方法，其特征在于：其包括以下步骤：1）茶树叶片的初步研磨、提取、静置取茶树叶片，剪成片状，称取4～5g茶树叶片置于研钵中，添加0.08～0.12g PVP，往研钵中加入液氮进行研磨，将研磨后的茶树叶片倒入离心管中，加入TCA/丙酮混合液A，然后漩涡振荡，离心，静置10～12h；所述TCA/丙酮混合液A是采用丙酮溶液进行配制，其中TCA含量为15%，巯基乙醇含量为0.1%，丙酮含量为84.9%；2）茶树叶片粗蛋白质纯化将静置后的样品离心，弃去上清液，加入TCA/丙酮混合液B，漩涡振荡，离心，弃去上清液，收集沉淀；所述TCA/丙酮混合液B是采用丙酮溶液进行配制，其中TCA含量为12%，巯基乙醇含量为0.08%，丙酮含量为87.2%；3）茶树叶片粗蛋白干燥将上述收集的沉淀置于‑80 ℃环境中20～25 min，然后将沉淀置于真空冷冻干燥箱中干燥10～12 h，获得茶树叶片粗蛋白干粉；4）茶树叶片蛋白的溶解与分离取上述茶树叶片粗蛋白干粉100 mg，加入蛋白质样品裂解液1200～1500 µL，然后漩涡振荡，超声，离心，收集上清液即为茶树叶片蛋白质溶液。