[发明专利]一种对柑橘黄龙病具有抗性或耐性的种质材料的快速鉴定方法

摘要

本发明公开了一种对柑橘黄龙病具有抗性或耐性的种质材料的快速鉴定方法，属于农业技术领域。所述对柑橘黄龙病具有抗性或耐性的种质材料的快速鉴定方法，包括如下步骤：步骤1：收集待鉴定的种质材料；步骤2：选取对步骤1待鉴定的种质材料具有嫁接亲和力且感染黄龙病菌的柑橘树，作为高接树；步骤3：高接；步骤4：田间管理；步骤5：田间症状观察；步骤6：实时荧光定量PCR检测；步骤7：结果评价。本发明首次提出了将待鉴定的种质材料直接高接于柑橘黄龙病树上进行抗性或耐性的鉴定，国内外未见有其它相关类似的报道。

主权项

1.一种对柑橘黄龙病具有抗性或耐性的种质材料的快速鉴定方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：收集待鉴定的种质材料；步骤2：选取对步骤1待鉴定的种质材料具有嫁接亲和力且感染黄龙病菌的柑橘树，作为高接树；步骤3：高接春接时间为2‑4月，高接方式为单芽切接，具体为：在步骤2选取的高接树上，选取直径0.5cm以上的枝条,在树皮平滑处剪断，在枝条断面下方，沿皮层与木质部交界处向下纵切一刀，露出形成层，切面短于接穗芽，然后从步骤1待鉴定的种质材料的枝条上切取单芽,并插入中间砧枝条切口上，对准双方形成层并缚紧；秋接时间为9‑11月，高接方式为小芽腹接，具体为：在步骤2选取的高接树上，选取直径0.5cm以上的枝条，在树皮平滑处沿皮层与木质部交界处向下纵切一刀，露出形成层，切面长度为2cm‑4cm,然后从步骤1待鉴定的种质材料的枝条上切取芽片，并插入中间砧枝条切口上并缚紧，保留高接枝条；步骤4：田间管理高接树的田间管理与普通柑橘果园管理一致；步骤5：田间症状观察在步骤3高接4个月后，根据待鉴定的种质材料抽出的枝梢的症状来进行诊断：枝梢生长良好、无黄梢、无黄叶或仅有轻微叶片黄化症状，则初步判定该种质材料对柑橘黄龙病具有抗性或耐性；枝梢生长较弱、黄梢严重、叶片斑驳型黄化症状明显，则初步判定该种质材料对柑橘黄龙病不具有抗性或耐性；步骤6：实时荧光定量PCR检测从高接成活且初步判定为对柑橘黄龙病具有抗性或耐性的种质材料的叶片中，提取DNA，得到待测样品的DNA模板；从健康柑橘树的叶片中，提取DNA，作为阴性对照；从柑橘黄龙病树的叶片中，提取DNA，作为阳性对照；进行实时荧光定量PCR扩增，绘制标准曲线，并建立标准曲线方程，计算出病原菌含量；步骤7：结果评价根据步骤6实时荧光定量PCR检测结果并结合步骤5田间症状观察结果，进行效果评价：待测样品中检测不到黄龙病菌且植株田间生长良好、无黄龙病症状，则判定该种质材料对柑橘黄龙病具有抗性；待测样品中能检测到黄龙病菌，但植株田间生长较好，有轻微黄龙病症状，则判定该种质材料对柑橘黄龙病具有耐性。