[发明专利]一种茶树蔗糖合酶CsSUS587、制备方法及应用有效
| 申请号： | 201910314683.0 | 申请日： | 2019-04-18 |
| 公开（公告）号： | CN109943547B | 公开（公告）日： | 2022-07-19 |
| 发明（设计）人： | 宋传奎;许淼晶;荆婷婷;张娜;靳洁阳;赵明月 | 申请（专利权）人： | 安徽农业大学 |
| 主分类号： | C12N9/10 | 分类号： | C12N9/10;C12N15/54;C12N15/70;C12P19/30 |
| 代理公司： | 西安铭泽知识产权代理事务所(普通合伙) 61223 | 代理人： | 俞晓明 |
| 地址： | 230036 安徽*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明属于分子生物技术领域，特别涉及一种茶树蔗糖合酶CsSUS587、制备方法及应用，包括以茶树cDNA为模板，设计引物，PCR扩增目的基因；构建连接体系反应得表达载体；将构建载体转化至感受态细胞中；茶树蔗糖合酶的分离纯化。本发明从制备的蔗糖合酶CsSUS587纯度高，能促进可催化尿苷二磷酸与蔗糖生成可用于糖苷合成的尿苷二磷酸葡萄糖，与糖基转移酶合用，可提高对应糖苷的合成效率。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 茶树 蔗糖 cssus587 制备 方法 应用 | ||
【主权项】：
1.一种茶树蔗糖合酶CsSUS587的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：目的基因克隆：以茶树cDNA为模板，设计引物，然后进行PCR反应；其中，引物序列：SalI：5’‑gatatcggatccgaattcgagctccgtcgacgcatggcatctcatgttctga‑3’，Notl：5’‑gatctcagtggtggtggtggtggtgctcgagtgcggccgcctactcaatagccaaagggacttctg‑3’；PCR反应体系：500ng/μL的茶树cDNA模板2μL，10μM的上、下游引物各2μL，高保真聚合酶24μL，ddH2O添至50μL；构建表达载体：构建连接体系，置于37℃水浴25‑30min再冰浴5‑10min；其中，连接体系为：5×CEⅡBuffer取2μL，pET‑32a+取3μL，PCR产物2μL，ExnaseⅡ试剂1μL，ddH2O添至10μL；转化：将构建载体转化至感受态细胞中，扩大培养后得含CsSUS587基因全长的工程菌；茶树蔗糖合酶的分离纯化：离心取沉淀，－80℃下放置2‑4h；加入1×wash buffer，超声破碎后离心得沉淀；沉淀加水混匀后过纯化柱，得茶树蔗糖合酶CsSUS587。
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