[发明专利]一种慢病毒转染囊胚滋养层细胞研究其基因功能的方法有效
| 申请号： | 201910315163.1 | 申请日： | 2019-04-18 |
| 公开（公告）号： | CN109975264B | 公开（公告）日： | 2022-04-08 |
| 发明（设计）人： | 曹祖兵;童旭;张丹丹;王怡青;宁伟;齐昕;高迪;许腾腾;张运海 | 申请（专利权）人： | 安徽农业大学 |
| 主分类号： | G01N21/64 | 分类号： | G01N21/64;G01N1/28 |
| 代理公司： | 合肥云道尔知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 34230 | 代理人： | 司楠 |
| 地址： | 230000 *** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种慢病毒转染囊胚滋养层细胞研究其基因功能的方法，包括如下步骤：培养碟的制备：取20.83uL胚胎培养液置于离心管中，加入1uL慢病毒，吹打混匀；再将胚胎培养液在培养皿中做培养滴，并加入3mL矿物油，将培养皿放在培养箱平衡3‑5h。慢病毒转染囊胚：用胚胎培养液将去除透明带后的囊胚清洗干净；清洗好的囊胚置于培养碟中，转染10‑14h；用DPBS液体将囊胚清洗干净，并用4％PFA固定10‑30min，再用DPBS清洗干净；DAPI染核，压片。本发明通过慢病毒转染实现干扰滋养层细胞中目的基因表达，从而有效地解决滋养层细胞中基因不能敲低或过表达的问题。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 病毒 转染 囊胚 滋养 细胞 研究 基因 功能 方法 | ||
【主权项】：
1.一种慢病毒转染囊胚滋养层细胞研究其基因功能的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)培养碟的制备：取20.83uL胚胎培养液置于离心管中，加入1uL慢病毒，吹打混匀；再将胚胎培养液在培养皿中做培养滴，并加入3mL矿物油，将培养皿放在培养箱平衡3‑5h；(2)慢病毒转染囊胚①挑选质量相同的扩张囊胚，去除囊胚最外层的透明带；②用胚胎培养液将去除透明带后的囊胚清洗干净；③把清洗好的囊胚置于步骤(1)制得的培养碟中，转染10‑14h；④用DPBS液体将囊胚清洗干净，并用4％PFA固定10‑30mi n，再用DPBS清洗干净；⑤DAPI染核，压片。
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