[发明专利]一种研究卵母细胞体外成熟中卵丘细胞基因功能的方法在审
| 申请号： | 201910315164.6 | 申请日： | 2019-04-18 |
| 公开（公告）号： | CN110016483A | 公开（公告）日： | 2019-07-16 |
| 发明（设计）人： | 曹祖兵;童旭;刘传江;张丹丹;高迪;许腾腾;王怡青;张运海 | 申请（专利权）人： | 安徽农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;G01N21/64 |
| 代理公司： | 北京轻创知识产权代理有限公司 11212 | 代理人： | 沈尚林 |
| 地址： | 230000 *** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种研究卵母细胞体外成熟中卵丘细胞基因功能的方法，包括如下步骤：成熟碟的制备：取20.83uL成熟液于200uL离心管中，再加入1uL慢病毒，吹打混匀；将混匀后的成熟液在培养皿中做培养滴，并加入3mL矿物油，将培养皿放在培养箱平衡3‑5h；慢病毒转染COCs：从卵泡中的挑选出COCs，再用成熟液IVM将COCs清洗三遍；把清洗好的COCs转染30‑50h，本发明的慢病毒转染卵丘‑卵母细胞复合物来发明卵母细胞成熟中卵丘基因功能的方法，通过慢病毒转染实现干扰卵丘细胞中目的基因或蛋白的表达，有效地解决卵丘细胞不能进行显微注射的问题，又能很好地发挥卵丘基因在卵母细胞成熟过程中发挥的作用。 | ||
| 搜索关键词： | 卵丘细胞 慢病毒 转染 基因功能 成熟液 卵丘 培养皿 卵母细胞成熟 混匀 卵母 清洗 成熟 矿物油 卵母细胞 目的基因 显微注射 吹打 复合物 离心管 培养箱 有效地 卵泡 制备 蛋白 基因 研究 平衡 | ||
【主权项】：
1.一种研究卵母细胞体外成熟中卵丘细胞基因功能的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)成熟碟的制备取20.83uL卵母细胞体外成熟培养液于200uL离心管中，再加入1uL慢病毒，吹打混匀；将混匀后的成熟液在培养皿中做培养滴，并加入3mL矿物油，将培养皿放在培养箱平衡3‑5h；(2)慢病毒转染卵丘‑卵母细胞复合物(COCs)从卵泡中的挑选出COCs，再用成熟液IVM将COCs清洗三遍；把清洗好的COCs转染30‑50h，并在荧光倒置显微镜下拍荧光图片。
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