[发明专利]一种用于冷冻的脐带血造血干细胞复苏后保护剂的配制方法

摘要

一种用于冷冻的脐带血造血干细胞复苏后保护剂的配制方法，本发明涉及一种用于冷冻的脐带血造血干细胞复苏后保护剂的配制方法。本发明的目的是为了解决现在使用生理盐水进行复苏冷冻的脐带血造血干细胞的前期处理，细胞很容易聚团、细胞碎片增多、活率降低以及细胞数量减少的问题，方法为：一、配置缓冲液；二、去除纤维蛋白的血浆；三、向缓冲液中加入低分子肝素钠、羟乙基淀粉和聚乙二醇；最后加入去除纤维蛋白的血浆，即完成。本发明保护剂能够有效保护细胞的活率，细胞不容易聚团，细胞集落形成较好，能够有效保护复苏后造血干细胞细胞的活性，细胞数量，细胞不聚团，保证集落的形成力；本发明应用于造血干细胞复苏后保护剂的配制领域。

主权项

1.一种用于冷冻的脐带血造血干细胞复苏后保护剂的配制方法，其特征在于该配制方法按以下步骤进行：一、配置缓冲液：称取氯化钠3～3.5g、氯化钾0.1～0.2g、氯化镁0.1～0.2g、醋酸钠1～1.5g、枸橼酸钠0.2～0.3g、葡萄糖酸钙0.3～0.4g和海藻糖0.2～0.3g；然后将氯化钠、氯化钾、氯化镁、枸橼酸钠依次溶于480～520mL去离子水中，搅拌至完全融化，加入葡萄糖酸钙和海藻糖，搅拌至溶解，静止8～12min，加入醋酸钠，搅拌均匀，静止4～6min,调节pH值在7.0‑7.2之间，得到缓冲液；二、去除纤维蛋白的血浆：向血浆中加入氯化钙溶液，振摇4～6min，通过密度梯度离心，取液相，得到去除纤维蛋白的血浆，于4℃低温或‑20℃冷冻保存；三、向步骤一配置的缓冲液中加入低分子肝素钠，混匀，加入羟乙基淀粉，混匀，加入聚乙二醇，混匀后，4℃预冷，得到保护剂，保护剂中低分子肝素钠终浓度为14‑16mol/mL；羟乙基淀粉终浓度为9‑11mol/mL，聚乙二醇的体积浓度为2‑3％；四、向步骤三配制的保护剂中加入去除纤维蛋白的血浆，去除纤维蛋白的血浆和保护剂的体积比为1：4，即得到用于冷冻的脐带血造血干细胞复苏后保护剂。