[发明专利]重组藏猪IFN-λ3成熟肽的克隆及表达方法和应用

摘要

本发明提供了一种重组藏猪IFN‑λ3成熟肽的克隆及表达方法和应用，通过提取IFN‑λ3总RNA，进行PCR扩增，将产物转化至感受态细胞中培养，以获得的质粒进行PCR扩增，产物转化感受态细胞中培养。通过将pMD19‑T‑mZPoIFN‑λ3双酶切并与pET‑32a(+)连接，进行转化培养，得到其表达载体。本发明重组藏猪IFN‑λ3成熟肽经试验证明，对PoRV具有较高的抗病毒效应，可应用于制备抗猪轮状病毒活性药物。

主权项

1.一种藏猪IFN‑λ3成熟肽的克隆方法，其特征在于，包括以下步骤：1)以从藏猪肺脏与肠道中提取的IFN‑λ3总RNA为模板，P1、P2为引物，反转录后进行PCR扩增；上游引物P1:5’‑ATGGCCCTGGGTGGCT‑3’；下游引物P2:5’‑TCAGACACACAGGTCTCCAC‑3’；2)对扩增的藏猪IFN‑λ3基因进行纯化，与载体pMD19‑T16℃连接过夜，将连接产物转化至DH5α感受态细胞中培养，获得的菌液抽提质粒命名为pMD19‑T‑ZPoIFN‑λ3；3)以上述的pMD19‑T‑ZPoIFN‑λ3的质粒为模板，P3和P4为上下游引物，进行PCR扩增，将产物纯化后转化至DH5α感受态细胞中培养。上游引物P3:5’‑CGCGGATCCGTGCCTGTCCCTGAAGCCC‑3’；下游引物P4:5’‑CCCAAGCTTTCAGACACACAGGTCTCCAC‑3’。