[发明专利]一种橘青霉发酵液中淀粉酶酶活力的检测方法

摘要

本发明公开了橘青霉发酵液中淀粉酶酶活力的检测方法，本发明使用DNS还原显色的方法检测橘青霉发酵液中还原糖的含量，本发明在DNS比色法的基础上，加入碘液指示剂，依据蓝色消失判断淀粉被淀粉酶完全分解，避免了传统滴定终点颜色判断失误的发生，进一步提高了检测结果的准确性。同时本发明还确定了橘青霉发酵液中淀粉酶的最佳酶解温度和最适DNS溶液添加量的选择，有力的确保工业化测定数值的准确性和测定方法应用的可行性，本发明检测淀粉酶活力的方法测定线性范围广，重复性好，适合工业和临床应用。

主权项

1.一种橘青霉发酵液中淀粉酶酶活力的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)取质量分数为1％的淀粉悬浮液1.0ml加入到25ml定量瓶中，添加pH为5.6柠檬酸‑柠檬酸钠缓冲液2ml，55℃预热10min；(2)取1ml待测橘青霉发酵液于试管中，于55℃水浴中预热10min；(3)将步骤(1)预热的淀粉缓冲液与步骤(2)预热的淀粉酶液混合反应，反应55℃反应30min后，加入碘液指示剂，直至蓝色消失，加入2.5～3ml DNS显色试剂，在100℃沸水浴中反应10min后，加入1.0ml4％NaOH溶液终止反应；(4)迅速冷却至室温，取适量反应液定容后，使用紫外分光光度测出520nm处吸光度的数值；(5)设置空白对照：操作同步骤(1)～(4)，只是在步骤(2)中不加所述的橘青霉酶液，以去离子水代替；按下式计算橘青霉发酵液中淀粉酶的活力：每1ml橘青霉发酵液含淀粉酶活力U＝K*N*(A—B)/W*(X÷60)；式中：A为反应样品紫外光密度值在标准曲线上查的毫克数，mg；B为空白样品紫外光密度值在标准曲线上查的毫克数，mg；U为橘青霉发酵液淀粉酶活性，u/ml；W为橘青霉发酵液样品取样量，ml；K为还原糖标准曲线斜率；X为酶解反应时间X min；60为1小时60min；N为稀释倍数，N＝稀释液体积V/25。