[发明专利]检测致急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌的荧光定量PCR方法在审
| 申请号： | 201910334455.X | 申请日： | 2019-04-24 |
| 公开（公告）号： | CN110106264A | 公开（公告）日： | 2019-08-09 |
| 发明（设计）人： | 韦信贤;童桂香;吴祥庆;杨琼;黄国秋;熊建华;谭红连;陈静 | 申请（专利权）人： | 广西壮族自治区水产科学研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/06;C12R1/63 |
| 代理公司： | 北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 崔自京 |
| 地址： | 530021 广*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种检测致急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌的荧光定量PCR方法，该方法具体包括以下步骤：(1)以VpAHPND的PirAVp基因为检测靶基因，设计特异性的引物和TaqMan‑MGB探针；(2)提取VpAHPND的DNA，并构建重组质粒，制备标准品，‑20℃保存备用；(3)进行荧光定量PCR反应，建立起始模板拷贝数的对数与阈值循环数之间的标准曲线和标准方程；(4)使用步骤(1)中的引物和探针对待测样品进行检测，将所测得的阈值循环数根据标准曲线即可计算出待测样品中VpAHPND的拷贝数。本发明建立的非诊断目的检测VpAHPND的荧光定量PCR方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好、能快速定量等优点，可用于临床对虾样品及水样的VpAHPND检测。 | ||
| 搜索关键词： | 荧光定量PCR 检测 副溶血弧菌 阈值循环数 标准曲线 坏死病 拷贝数 胰腺 引物 荧光定量PCR反应 构建重组质粒 标准方程 待测样品 对虾样品 快速定量 起始模板 特异性强 靶基因 标准品 灵敏度 种检测 可用 水样 探针 制备 备用 诊断 保存 | ||
【主权项】：
1.一种检测致急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌的荧光定量PCR方法，其特征在于，具体包括以下步骤：(1)以致急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌的PirAVp基因为检测靶基因，设计特异性的引物和TaqMan‑MGB探针，探针的5′端标记荧光基团FAM，3′端标记MGB基团；(2)提取致急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌的DNA，并构建重组质粒，测定其浓度后10倍梯度稀释为1.0×101‑1.0×109拷贝/μL作标准品，‑20℃保存备用；(3)以步骤(2)中9个梯度的标准品DNA为模板，进行荧光定量PCR反应，建立起始模板拷贝数的对数与阈值循环数之间的标准曲线和标准方程；(4)先将待测样品进行前处理，然后使用步骤(1)中的引物和探针对待测样品进行检测，将所测得的阈值循环数根据标准曲线即可计算出待测样品中致急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌的拷贝数。
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