[发明专利]一种BRCA高通量测序文库及其构建方法和应用在审
| 申请号： | 201910349374.7 | 申请日： | 2019-04-28 |
| 公开（公告）号： | CN110129414A | 公开（公告）日： | 2019-08-16 |
| 发明（设计）人： | 沈伟强;胡文玮;焦海涛;何志辉;熊江红;谢秒秒;张瑞华;叶嘉惠;李飞燕;朱建华;廖敔;方姝;葛海鹏 | 申请（专利权）人： | 安徽鼎晶生物科技有限公司;上海鼎晶生物医药科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12N15/10;C40B50/06 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 瞿晓晶 |
| 地址： | 236600 安徽省阜阳市太和*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种BRCA高通量测序文库的构建方法，属于高通量测序领域。本发明提供的BRCA高通量测序文库的构建方法包括初始文库的生成，初始文库的纯化，测序文库的生成和测序文库的纯化。本发明提供的BRCA高通量测序文库构建方法全程在一个容器中进行，避免了交叉污染的可能性。本发明提供的方法利用磁珠反应结合洗涤操作，最大程度保证了纯化的高效和便捷。利用本发明提供的方法，能使模板的利用率大大提高。 | ||
| 搜索关键词： | 测序文库 高通量 构建 文库 高通量测序 交叉污染 洗涤操作 磁珠 全程 应用 保证 | ||
【主权项】：
1.一种BRCA高通量测序文库的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)以包括类乳腺易感基因的DNA片段为模板，在容器中进行多重PCR扩增，得到BRCA初始文库；(2)向所述容器中加入0.8～1.2倍PCR反应体系体积的磁珠液，反应1～30min后，弃上清液，得到第一磁珠；(3)对步骤(2)所述第一磁珠上吸附的BRCA初始文库进行清洗纯化；(4)对所述清洗纯化后的BRCA初始文库依次进行加A反应和连接反应，得到BRCA测序文库；(5)向装有所述BRCA测序文库的原容器中加入0.8～1.2倍加A反应体系体积的磁珠液，反应1～30min后，弃上清液，得到第二磁珠；(6)对步骤(5)所述第二磁珠进行清洗纯化，得到纯化磁球；(7)洗脱所述纯化磁珠表面的DNA，连接后得到的洗脱液即为纯化的BRCA测序文库；所述步骤(1)～(7)在同一个容器中操作。
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