[发明专利]一种测定血浆中洛索洛芬及其反式羟基体浓度的方法

摘要

本发明公开了一种测定血浆中洛索洛芬及其反式羟基体浓度的方法，包括以下步骤：储备液的配制、工作液的配制、标准曲线和质控样本的配制、样品预处理方法以及LC‑MS/MS分析；本法建立了一种简单、快速、耐用、灵敏度高和选择性好的用于同时测定EDTA‑K2抗凝人血浆中洛索洛芬及其活性代谢物反式‑OH血药浓度的LC‑MS/MS方法，该方法可用于EDTA‑K2抗凝人血浆中洛索洛芬和反式‑OH体洛索洛芬的同时定量分析，与荧光法和紫外检测法相比，本法更为灵敏，洛索洛芬的定量下限从0.31mg/mL和0.20mg/mL降低到了0.050mg/mL，反式‑OH体洛索洛芬的定量下限从0.31mg/mL和0.20mg/mL降低到了0.010mg/mL，同时分析时间大为缩短，从25min和30min缩短到了3.5min。

主权项

1.一种测定血浆中洛索洛芬及其反式羟基体浓度的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：储备液的配制：用甲醇：水（1：1，v：v）作为稀释液溶解洛索洛芬和反式‑OH体洛索洛芬对照品，得浓度为400μg/mL的洛索洛芬标准曲线储备液（STD Stock‑LSLF）和洛索洛芬质控储备液（QC Stock‑LSLF），浓度为200μg/mL的反式‑OH体洛索洛芬标准曲线储备液（STD Stock‑Trans‑OH）和反式‑OH体洛索洛芬质控储备液（QC Stock‑Trans‑OH）；S2：工作液的配制：标准曲线工作液以STD Stock‑LSLF和STD Stock‑Trans‑OH为起始溶液，以甲醇：水（1：1，v：v）溶液为稀释溶剂逐级稀释得到同时含有洛索洛芬和反式‑OH体洛索洛芬的各级标准曲线工作液；质控工作液以QC Stock‑LSLF和QC Stock‑Trans‑OH为起始溶液，以甲醇：水（1：1，v：v）溶液为稀释溶剂逐级稀释得到同时含有洛索洛芬和反式‑OH体洛索洛芬的各级质控工作液；S3：标准曲线和质控样本的配制：吸取95%体积的EDTA‑K2抗凝人空白血浆，加入5%体积上述各浓度的工作液，得到曲线样本和质控样本；S4：样品预处理方法：取50μL血浆样品于96孔板中，加入内标溶液30μL(氘代洛索洛芬2μg/mL)，加入沉淀剂甲醇 450μL，震荡5min，高速离心(4000rpm)15分钟，取上清200μL 于另一96 深孔板中，高速离心(4000 rpm)3分钟后进LC‑MS/MS 分析，进样体积1μL；S5：LC‑MS/MS分析：LC‑MS/MS系统由Q‑Trap 5500 型三重四极杆串联质谱仪（AB Sciex）、高压泵（LC‑30AD）、在线脱气机（DGU‑20A‑5R）、自动进样器（SIL‑30AC）、柱温箱（CTO‑20A）及控制器CBM‑20Alite组成；柱温箱和进样器的温度分别设定为40℃和4℃，使用型号为Welch，Ultimate XP‑C18, 5.0 μm, 2.1*100 mm的色谱柱作为分离柱，乙腈：水：乙酸（40：60：1，v：v：v）作为流动相，等度条件，流速为0.60mL/min分离分析物，分析时间为3.5分钟；离子源的极性为正模式，离子监测方式为多反应监测（MRM），经过电参数优化后，去簇电压（DP）分别为‑80、50、55V，碰撞电压（CE）分别为‑18、‑11和‑19V，数据采集系统为Analyst1.6.3。