[发明专利]磁珠法FFPE组织中DNA提取方法

摘要

本发明公开了医药技术领域的一种磁珠法FFPE组织中DNA提取方法，使用新型脱蜡液，可同时在脱蜡液中进行FFPE样本的消化，将DNA释放到混合液中，再加入独特的磁珠，使其与DNA特异性结合。在一定比例的乙醇漂洗液中，将该体系中的蛋白质和其余杂质去除，只留下磁珠上结合的DNA，最后DNA在水溶液或低盐缓冲液中进行洗脱，得到的DNA。本发明具有简便、快速和操作安全等优点。

主权项

1.一种磁珠法FFPE组织中DNA提取方法，其特征在于：使用试剂盒提取DNA的实验流程如下：1)取样：每个样本选取1～3张未染色5‑10μm厚FFPE切片，置于干净的纸巾上，另取干净1.5mL离心管，并标记好样本名或编号；2)先用移液器取200μL脱蜡液加入到离心管中，将刮取组织的刀片在离心管中浸湿；3)用刀片从切片上刮下石蜡包埋的组织，转移至离心管中，再取200μL脱蜡液冲洗刀片上残留组织样本至离心管中，涡旋混匀20s；4)短暂离心，置于恒温混匀仪上56℃孵育5min，再涡旋混匀20s；5)短暂离心，加入20μL蛋白酶K，盖好管盖上下颠倒混匀，加入200μL裂解消化液，涡旋混匀10s；6)短暂离心，置于恒温混匀仪上56℃，800rpm振荡孵育2小时，再90℃孵育60min；7)从冰箱取出磁珠室温平衡30min；8)孵育完的组织短暂离心，取下层消化液转移至新的1.5mL离心管，并标记好样本名或编号；9)消化液中加入300μL结合液和20μL磁珠至样本中，涡旋混匀20s，短暂离心，室温孵育5min，期间颠倒混匀数次；10)将样本转移至磁力架上吸附2min，吸弃上清液；11)加入500μL漂洗液1，涡旋混匀15s重悬磁珠，将样本转移至磁力架上吸附2min，吸弃上清液；12)加入500μL漂洗液2，涡旋混匀15s重悬磁珠，将样本转移至磁力架上吸附2min，吸弃上清液；13)重复步骤12一次；14)短暂离心，将样本管转移至磁力架上吸附1min，吸弃所有残余液；15)打开管盖，室温干燥5～10min；16)加入50μL洗脱液，提前55℃预热，涡旋打散磁珠；55℃，1500rpm振荡孵育10min；17)将样本管转移至磁力架上吸附2min，把上清转移至新的1.5mL离心管中，‑80℃保存。