[发明专利]一种去除调节性T细胞的肿瘤疫苗的制备方法

摘要

本发明涉及肿瘤疫苗生产领域，提供一种去除调节性T细胞的肿瘤疫苗的制备方法，用于解决调节性T细胞导致肿瘤疫苗效果下降的问题。本发明提供的一种去除调节性T细胞的肿瘤疫苗的制备方法，包括：向T淋巴细胞群内加入经过改性的纳米氧化钨颗粒，所述纳米氧化物颗粒同T淋巴细胞群的重量比为1:100~500，在可见光下照射3~10min；将经过照射的T淋巴细胞群通过磁性分选，获取CD8+T淋巴细胞；将致敏的DC细胞和分选出的CD8+T淋巴细胞混合培养，携带肿瘤抗原的DC细胞将抗原信息提呈给CD8+T淋巴细胞并使之活化，得到特异性肿瘤疫苗。筛选出T淋巴细胞群后，通过加入纳米氧化钨颗粒以及磁性分选，充分的去除调节性T细胞，以提高肿瘤疫苗的杀瘤效果。

主权项

1.一种去除调节性T细胞的肿瘤疫苗的制备方法，其特征在于，包括：S1.采集患者80~100ml的自体外周血，采用Ficoll‑Paque Plus试剂分离其中的单个核细胞，置于全营养培养基中培养，所述全营养培养基为添加青/链霉素和10%FBS的1640培养基，并将培养基置于CO₂细胞孵育箱内放置2~5小时后收集悬浮液，离心获得T淋巴细胞群，贴壁的DC细胞加DC培养基继续培养，第8天开始，收集含有非贴壁细胞的培养上清，更换培养基，共两天，合并所收集的上清，离心获得DC细胞；S2.DC细胞用相应的肿瘤抗原刺激，使DC在细胞在体外致敏，得到致敏的DC细胞； S3.向T淋巴细胞群内加入经过改性的纳米氧化钨颗粒，所述纳米氧化物颗粒同T淋巴细胞群的重量比为1:100~500，在可见光下照射1~2h；S4.将经过照射的T淋巴细胞群通过磁性分选，获取CD8+T淋巴细胞； S5.将致敏的DC细胞和分选出的CD8+T淋巴细胞混合培养，携带肿瘤抗原的DC细胞将抗原信息提呈给CD8+T淋巴细胞并使之活化，得到特异性肿瘤疫苗。