[发明专利]一种基于外源饱和脂肪酸添加的纳他霉素发酵工艺

摘要

本发明公开了一种基于外源饱和脂肪酸添加的纳他霉素发酵工艺，通过添加对细胞没有任何毒副作用的缓释前体来源——饱和脂肪酸，其在细胞内进行β氧化利用时将产生大量乙酰CoA前体和NADH，从而保障纳他霉素大环内酯前体和ATP的供应，促进产物合成。由于饱和脂肪酸常温下呈固态，且不溶于水，其浓度不会影响发酵液中的细胞生长和代谢，因此本工艺中不需要进行严格的饱和脂肪酸浓度控制。本方法能够有效提高纳他霉素的生物合成水平，并大幅降低在发酵液中精密调控前体浓度的检测和补料操作负荷，在工业上具有重要的应用价值。

主权项

1.一种基于外源饱和脂肪酸添加的纳他霉素发酵工艺，采用分批发酵的方式，其特征在于包括如下步骤：步骤1：发酵种子培养将褐黄孢链霉菌接种于固体贝塔纳培养基上，于29℃恒温培养箱中培养10天，直至长出褐黄色孢子；用接种环挑取3环孢子置于装有60mL液体种子培养基的500mL三角瓶中，于29℃、220rpm条件下恒温振荡培养2天；步骤2：5L发酵罐分批培养的前处理配制除去葡萄糖的纳他霉素发酵培养基，加入到5L发酵罐中，总装液量设置为1.5L，另添加80g饱和脂肪酸，于115‑121℃灭菌20‑30min，结束后立即开动搅拌，并开通控温系统使发酵罐冷却至29℃，此过程可将高温脂肪酸液滴打碎，冷却后形成小粒度固体饱和脂肪酸；然后将灭菌的溶有80g葡萄糖的500mL水溶液用蠕动泵全部补入，配成混合碳源发酵培养基；步骤3：5L发酵罐分批发酵向步骤2获得的混合碳源发酵培养基中以8％的接种量接种步骤1获得的发酵种子，培养发酵，全过程发酵pH值不进行控制，直至纳他霉素合成停止。