[发明专利]一种高效重组且无筛选标记的痘苗病毒载体及其建立方法在审
| 申请号： | 201910370701.7 | 申请日： | 2019-05-06 |
| 公开（公告）号： | CN110029128A | 公开（公告）日： | 2019-07-19 |
| 发明（设计）人： | 郭斐;许丰雯;张迪 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院病原生物学研究所 |
| 主分类号： | C12N15/863 | 分类号： | C12N15/863;C12N7/01;C12N15/113;C12N15/90 |
| 代理公司： | 北京汇捷知识产权代理事务所(普通合伙) 11531 | 代理人： | 于鹏 |
| 地址： | 100730*** | 国省代码： | 北京;11 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种高效重组且无筛选标记的痘苗病毒载体及其建立方法，利用CRISPR‑Cas9技术敲除痘苗病毒天坛株TK区，然后转染带有EGFP的重组质粒pJ2R‑EGFP‑LoxP。通过荧光筛选，获得缺失TK并插入EGFP的重组病毒，经计算比传统同源重组的效率提高几十倍，建立一种高效重组痘苗病毒载体的系统。在此重组病毒载体的基础上，利用Cre‑LoxP系统将重组病毒载体中的筛选标记EGFP删除，通过分子克隆技术、Western Blot实验、免疫荧光、PCR技术等验证得到的重组病毒准确在特定位点删除EGFP。本发明建立一种高效重组痘苗病毒载体的系统，并将痘苗病毒载体的筛选标记删除，提高了在疫苗载体构建、肿瘤免疫治疗等方面的应用价值。 | ||
| 搜索关键词： | 筛选标记 痘苗病毒载体 删除 重组病毒载体 重组痘苗病毒 重组病毒 痘苗病毒天坛株 分子克隆技术 肿瘤免疫治疗 免疫荧光 同源重组 疫苗载体 荧光筛选 重组质粒 构建 敲除 位点 转染 验证 应用 | ||
【主权项】：
1.一种高效重组且无筛选标记的痘苗病毒载体的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、采用CRISPR‑Cas9技术敲除痘苗病毒TK基因，然后转染带有EGFP的重组质粒pJ2R‑EGFP‑LoxP，获得缺失TK带有EGFP的重组病毒VACV‑ΔTK‑EGFP‑LoxP；S2、采用Cre‑LoxP系统将带有EGFP的重组病毒VACV‑ΔTK‑EGFP‑LoxP中的筛选标记EGFP删除，最终获得无EGFP的重组病毒载体VACV‑ΔTK。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国医学科学院病原生物学研究所，未经中国医学科学院病原生物学研究所许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201910370701.7/，转载请声明来源钻瓜专利网。
