[发明专利]一种卤醇脱卤酶文库定量筛选方法及相关微流体系统在审
| 申请号： | 201910376237.2 | 申请日： | 2019-05-07 |
| 公开（公告）号： | CN110055169A | 公开（公告）日： | 2019-07-26 |
| 发明（设计）人： | 汤丽霞;伊嘉格尔;陈勇;邓娇;方瑞琴 | 申请（专利权）人： | 电子科技大学 |
| 主分类号： | C12M1/34 | 分类号： | C12M1/34;C12M1/00;C12Q1/34;C40B30/08 |
| 代理公司： | 成都点睛专利代理事务所(普通合伙) 51232 | 代理人： | 葛启函 |
| 地址： | 611731 四川省成*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 一种卤醇脱卤酶文库定量筛选方法及相关微流体系统，属于酶工程技术领域。本发明利用卤醇脱卤酶催化底物释放质子造成pH降低，pH降低可通过指示剂颜色改变来反映，在比色原理的基础上搭建集成图像采集和图像分析设备的微流体系统。所述文库定量筛选的方法基于纸质微流体平台，在固定有指示剂的微流体载体上吸附卤醇脱卤酶，滴加底物后进行孵育，通过指示剂检测pH值变化，发生颜色变化后进行图像采集，通过图像分析获取质子浓度和指示剂颜色强度的线性关系作为标准曲线，基于所述标准曲线检测吸附卤醇脱卤酶突变体的微流体反应体系中质子浓度，通过微流体反应体系中质子浓度实现酶活性的测定。本发明具有简单、快速、灵敏的特点，实现了卤醇脱卤酶文库的定量筛选。 | ||
| 搜索关键词： | 卤醇脱卤酶 质子 文库 微流体系统 筛选 微流体反应 指示剂颜色 标准曲线 吸附 卤醇脱卤酶突变体 图像分析设备 酶工程技术 微流体平台 指示剂检测 催化底物 集成图像 图像采集 图像分析 线性关系 颜色变化 酶活性 微流体 指示剂 比色 滴加 底物 孵育 纸质 灵敏 采集 释放 检测 | ||
【主权项】：
1.一种用于酶蛋白文库筛选的微流体系统，其特征在于，包括微流体平台、图像采集设备以及后端图像分析设备；所述微流体平台包括吸附有pH指示剂和缓冲液的载体，所述微流体平台用于反映文库中酶蛋白突变体催化底物导致微环境pH变化所引起的颜色变化，所述图像采集设备用于采集微流体平台的颜色图片，所述图像分析设备用于分析所述颜色图片的颜色强度并基于质子浓度与颜色强度间的标准曲线计算酶活。
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