[发明专利]一种成年小鼠心脏成纤维细胞的培养方法在审
| 申请号： | 201910382453.8 | 申请日： | 2019-05-08 |
| 公开（公告）号： | CN110358723A | 公开（公告）日： | 2019-10-22 |
| 发明（设计）人： | 刘世明;刘宁宁;顾杰蕾;周文怡;徐如芹 | 申请（专利权）人： | 广州医科大学附属第二医院 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 刘孟斌 |
| 地址： | 510260 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种成年小鼠心脏成纤维细胞的培养方法，包括步骤：取SPF级8～12周龄的小鼠，颈椎脱臼后杀菌；取出小鼠的心脏，放入盛有预冷无钙HBSS的培养皿中，挤出心脏中残留的血液，去除心脏心房、左右心耳、心包膜，保留心室，转移到新的盛有预冷无钙HBSS的培养皿中，将心脏剪碎，转移至离心管中，待心脏组织沉淀后，将HBSS用移液器吸出；离心管中加入胶原酶消化液消化，然后重悬获得细胞悬液；铺板至第一培养皿中，静置培养；然后重悬细胞、离心弃上清，用培养基重悬细胞铺板至第二培养皿中，原有的第一培养皿加入新的培养基，即得。该培养方法简单易行，稳定性好，重复性高，形态均一，所得成纤维细胞生长良好。 | ||
| 搜索关键词： | 培养皿 重悬 心脏成纤维细胞 成年小鼠 培养基 离心管 心脏 小鼠 预冷 成纤维细胞 胶原酶消化 铺板 静置培养 细胞铺板 细胞悬液 心脏心房 心脏组织 心包膜 移液器 原有的 心室 放入 剪碎 颈椎 均一 去除 吸出 心耳 杀菌 沉淀 挤出 取出 残留 血液 细胞 消化 生长 保留 | ||
【主权项】：
1.一种成年小鼠心脏成纤维细胞的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)取SPF级8～12周龄的小鼠，颈椎脱臼后转入超净工作台杀菌；快速打开小鼠胸腔，取出小鼠的心脏，放入盛有预冷无钙HBSS的培养皿中，挤出心脏中残留的血液，去除心脏心房、左右心耳、心包膜，保留心室，得到处理后的小鼠心脏；(2)将步骤(1)处理后的小鼠心脏转移到新的盛有预冷无钙HBSS的培养皿中，将心脏剪碎，将HBSS和剪碎的心脏组织共同转移至离心管中，待心脏组织沉淀后，将HBSS用移液器吸出；(3)向步骤(2)所得盛有心脏组织沉淀的离心管中加入胶原酶消化液；将离心管置于恒温摇床中震荡消化，然后转移至生物安全柜中，用移液器反复吹打，直至无明显沉淀，获得细胞悬液；(4)将步骤(3)所得细胞悬液离心并弃上清，加入培养基重悬细胞，铺板至第一培养皿中，置于CO2培养箱内静置培养；然后重悬细胞、离心弃上清，用培养基重悬细胞铺板至第二培养皿中，原有的第一培养皿加入新的培养基；(5)将步骤(4)所得第一培养皿和第二培养皿放入培养箱中继续培养，然后取出第二培养皿，重悬细胞、去上清后加入新的培养基继续培养；第一培养皿和第二培养皿中所得即为成年小鼠的心脏成纤维细胞。
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