[发明专利]一种能防止褐化的川贝母组织培养方法

摘要

本发明公开了一种能防止褐化的川贝母组织培养方法，该方法包括如下步骤：外植体的选取及消毒；接种前预处理；预培养、诱导培养；继代培养；增值培养；生根培养。本发明通过控制取材时间、培养基成分、培养温度及前处理能够实现防止川贝母组织培养中褐化现象的产生，实现川贝母的快速繁育，为生产提供大量优质种苗。在保证川贝母正常生长的情况下，有效降低褐化率，褐化率降低到33％以下，解决了川贝母组织培养褐化率高达50％以上的难题。

主权项

1.一种能防止褐化的川贝母组织培养方法，其特征在于包括以下步骤：(1)外植体的选取与消毒选取新鲜、健康的川贝母鳞茎为外植体，将川贝母鳞茎进行消毒；(2)接种前预处理将消毒后的川贝母鳞茎用无菌吸水纸吸干表面水分，在无菌条件下切割成粒径为0.5～0.8cm的小方块，再将其浸泡于浓度为1.9～2.8g/L的聚乙烯吡咯烷酮溶液10～15min；(3)预培养将浸泡后的川贝母鳞茎接种于下列固体培养基进行预培养：MS+10‑20g/L猕猴桃+10‑20g/L蜂蜜+10‑20g/L香蕉+4.5g/L琼脂+30g/L蔗糖；培养条件为温度22℃，空气相对湿度70～80％，光照时间12小时/天，光照强度2000Lux，培养5～10天；(4)诱导培养将完成预培养的外植体接种于下列初代愈伤组织诱导培养基中进行诱导培养：MS+0.5～1.5mg/L6‑BA+0.5～1.5mg/LNAA+1～1.5mg/L2，4‑D+30g/L蔗糖+4.5～5g/L琼脂，pH：5.5～5.9；培养条件为温度22℃，空气相对湿度70～80％，光照时间12小时/天，光照强度2000Lx，培养时间为15～18天；(5)继代培养将诱导后得到的块状愈伤组织切成粒径为0.5～0.8cm的小方块，接种到下列继代培养基中进行继代培养：MS+0.3～2.5mg/L6‑BA+0.1～1.5mg/L2，4D+30g/L蔗糖+4.5～5g/L琼脂，pH：5.5～5.9；培养条件为温度22℃，空气相对湿度70～80％，光照时间12小时/天，光照强度2000Lx，继代时间为21～24天；(6)增殖培养经继代后得到的块状致密愈伤组织，接种于下列初代愈伤组织诱导培养基中诱导产生疏松的颗粒状愈伤组织：MS+0.5～1.5mg/L6‑BA+0.5～1.5mg/LNAA+1～1.5mg/L2，4‑D+30g/L蔗糖+4.5～5g/L琼脂，pH：5.5～5.9；培养条件为20℃/白天，18℃/黑夜，空气相对湿度70～80％，光照强度500～1000Lx，11h白天，13h黑夜，培养时间为21～24天；(7)生根培养将步骤(6)中得到的小鳞茎切下，接种于下列生根培养基中培养，即完成组织培养，进而炼苗移栽：1/2MS+IBA+KT+NAA+30g/L糖+6.5g/L琼脂+2g/L活性炭。