[发明专利]标记的维生素D2内标化合物的制备方法

摘要

本发明涉及一种标记的维生素D2内标化合物的制备方法，其包括如下步骤：先将下式（Ⅳ）γ‑酰胺磷盐化合物与下式（Ⅲ）醛，‑40～0℃反应得下式（Ⅴ）中间体；再随后加入Boc酸酐和催化剂反应，再滴加同位素标记甲基格式试剂得下式（Ⅵ）中间体；然后加入四丁基氟化铵反应得成品标记的维生素D2内标化合物。本发明具有的优点为制备的标记的维生素D2内标化合物可用于25‑羟基维生素D2和1，25‑二羟基维生素D2及其串联质谱法检测人血清中VD含量。

主权项

1.一种标记的维生素D2内标化合物的制备方法，其包括如下步骤：（1）、将下式（Ⅳ）γ‑酰胺磷盐化合物溶于溶剂中后，氮气保护中在‑40～0℃滴加强碱，滴加完毕后升温至室温反应1～3小时；然后再冷却至‑40～0℃滴加下式（Ⅲ）醛，‑40～0℃反应1～3小时后室温至室温反应8～14小时，然后加入稀盐酸淬灭反应，分出有机相，乙醚萃取水相，合并有机相，无水硫酸镁干燥；浓缩有机相，硅胶柱层析（石油醚/乙酸乙酯：5/1）纯化，得下式（Ⅴ）中间体；其中R₁为叔丁基二甲基硅基、三乙基硅基、三甲基硅基、叔丁基二苯基硅基等；R₂为氢或叔丁基二甲基硅氧基、三乙基硅氧基、三甲基硅氧基、叔丁基二苯基硅氧基等R₃为苯基、取代苯基或者烷基；R₄为苯基、取代苯基或者烷基；强碱为甲基锂、乙基锂、正丁基锂或仲丁基锂；溶剂为乙醚、甲基叔丁基醚、四氢呋喃或乙二醇二甲醚；式（Ⅳ）γ‑酰胺磷盐化合物与强碱的摩尔比为1:1.5～1:3；式（Ⅳ）γ‑酰胺磷盐化合物与式（Ⅲ）醛的摩尔比为1:1～1.5:1；式（Ⅳ）γ‑酰胺磷盐化合物与溶剂的重量体积比(g：ml)为1:8～1:15；（2）、在上述制得的式（Ⅴ）中间体加入到反应溶剂中，随后加入Boc酸酐和催化剂，室温搅拌反应6～15小时，反应结束后先后用稀盐酸和饱和食盐水依次洗涤反应液，无水硫酸镁干燥，最后浓缩有机相；往浓缩物中加入无水乙醚，控制温度0℃，缓慢滴加同位素标记甲基格式试剂，滴加完毕后室温搅拌1～5小时，反应结束后用稀盐酸淬灭反应，分出有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥，最后浓缩有机相得下式（Ⅵ）中间体；其中R为甲基‑D₃、甲基‑¹³C或甲基‑¹³C, D₃；反应溶剂为二氯甲烷、1,2‑二氯乙烷、乙醚、甲基叔丁基醚或四氢呋喃；催化剂为吡啶、2‑甲基吡啶、2，6‑二甲基吡啶或4‑二甲氨基吡啶中；式（Ⅴ）中间体与催化剂的摩尔比1:0.05～1:0.15；式（Ⅴ）中间体与反应溶剂的重量体积比(g：ml)为1:10～1:25；式（Ⅴ）中间体与Boc酸酐的摩尔比1:2～1:3；式（Ⅴ）中间体与同位素标记甲基格式试剂的摩尔比1:1～1:1.5；（3）、将步骤（2）中制得的式（Ⅵ）中间体加入到溶剂中，然后加入四丁基氟化铵（TBAF），室温搅拌反应8～14小时，反应结束后加入水稀释反应液，乙酸乙酯萃取，无水硫酸镁干燥有机相，浓缩有机相得粗品，硅胶柱层析（石油醚/乙酸乙酯：3/1）纯化，得成品标记的维生素D2内标化合物；溶剂为乙醚、甲基叔丁基醚、四氢呋喃或乙二醇二甲醚；式（Ⅵ）中间体与四丁基氟化铵的摩尔比为1:0.5～1:0.15；式（Ⅵ）中间体与溶剂的重量体积比(g：ml)为1:10～1:25。