[发明专利]阿糖胞苷修饰的载甲氨喋呤脂质体的制备方法及应用

摘要

本发明提供一种阿糖胞苷修饰的载甲氨喋呤脂质体的制备及其应用。通过以磷脂、胆固醇、阿糖胞苷‑PEG2k‑DSPE和甲氨喋呤为原料，采用薄膜分散法结合超声、高压匀质法，经溶解，成膜，水化，超声、高压匀质，冷冻干燥制备。本方法制备的脂质体的粒径约为125nm，分散系数为0.218，甲氨喋呤的载药量约为10.37％，包封率约为85.26％。绒毛膜癌细胞表面的核苷转运蛋白1能够特异性识别阿糖胞苷并介导阿糖胞苷修饰的载甲氨喋呤脂质体进入细胞，进而增了药物的细胞毒性。该阿糖胞苷修饰的载甲氨喋呤脂质体制备工艺简单，易于放大生产，为绒毛膜癌治疗提供新型药物制剂。

主权项

1.一种阿糖胞苷修饰的载甲氨喋呤脂质体的制备方法，其特征在于，通过以下步骤实现：(1)阿糖胞苷‑PEG_2k‑DSPE的合成：(a)取DSPE‑PEG_2k‑COOH，溶于二甲基甲酰胺后摇匀，然后取阿糖胞苷，2‑(7‑氧化苯并三氮唑)‑N,N,N',N'‑四甲基脲六氟磷酸酯、三乙胺、和1‑羟基苯并三唑，依次加入到上述二甲基甲酰胺溶液体系，冰浴搅拌；(b)步骤(a)反应完成以后，将反应体系移至截留分子量为3500Da的透析袋，在1000ml去离子水中透析72h，每隔6h换一次去离子水；(c)透析结束后，将透析袋中的液体程序降温后冷冻干燥48h，即得到阿糖胞苷‑PEG_2k‑DSPE；(2)阿糖胞苷修饰载甲氨喋呤的脂质体的制备：(a)溶解：取卵磷脂和胆固醇，溶于氯仿10mL中，涡旋直至完全溶解；(b)成膜:将上述氯仿溶液加入至500mL梨形烧瓶中，在旋转蒸发仪上减压蒸发，至瓶壁上形成一层浅黄色的薄膜，置于真空干燥箱内过夜，除去痕量残留氯仿；(c)水化：先配置0.5M NaOH溶液，用于溶解甲氨喋呤，然后用HCl溶液调pH至7‑8；纯水定容配置成2mg/ml的甲氨喋呤溶液，取2mg/ml MTX溶液，加入至成膜后的梨形烧瓶中，40℃水化30min，至黄色澄清溶液逐渐变黄色胶体状溶液；(d)超声：将上述黄色胶体状溶液移至15ml离心管，然后用细胞超声粉碎仪超声5min；(e)高压匀质机过膜：在高压匀质机装上100nm有机滤膜，将上述超声处理后的分散液匀质15分钟，即得到粒径均一的阿糖胞苷修饰的载甲氨喋呤脂质体分散液；(f)冷冻干燥：将上述制备完成的脂质体分散液加入冻干保护剂后程序降温，并冷冻干燥72h得到阿糖胞苷修饰载甲氨喋呤的脂质体。