[发明专利]一种制备转人抑癌基因鸡的方法有效
| 申请号： | 201910402086.3 | 申请日： | 2019-05-15 |
| 公开（公告）号： | CN110178793B | 公开（公告）日： | 2021-05-14 |
| 发明（设计）人： | 雷雪芹;徐廷生 | 申请（专利权）人： | 河南科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/66 | 分类号： | C12N15/66 |
| 代理公司： | 郑州明华专利代理事务所(普通合伙) 41162 | 代理人： | 高丽华 |
| 地址： | 471000 河南*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 本发明涉及转基因技术领域，具体涉及一种转人抑癌基因鸡的制备方法，主要采用Trizol法从早期结肠癌病人的外周血中提取的总RNA，经RT‑PCR扩增人抗癌基因的编码区；从鸡的肝脏组织提取基因组DNA，经PCR扩增MAR调控序列；扩增产物经限制性内切酶消化，DNA连接酶的连接后，转化入感受态大肠杆菌，构建重组真核表达载体pEGFP‑N1‑人抑癌基因和pEGFP‑N1‑人抑癌基因/MAR；然后通过脂质体介导法体外转染人的HepG2肝癌细胞系，最后结合胚盘显微注射法，将脂质体介导的重组真核表达载体pEGFP‑N1‑人抑癌基因/MAR注射到入孵12‑24h的种蛋X期胚盘不同区域，结合蛋壳膜+蛋清封口后继续孵化，记录每组孵化率，进而通过基因检测、荧光检测及外源蛋白检测转人抑癌基因鸡的外源基因整合情况。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 制备 转人抑癌 基因 方法 | ||
【主权项】：
1.一种转人抑癌基因鸡，其特征在于：是将人抑癌基因经过RT‑PCR扩增、酶切、连接、转化，采用脂质体包埋法转染含人抑癌基因及MAR调控序列的非病毒重组载体，并采用显微注射法将脂质体介导的重组载体注射到开口种蛋的胚盘中，将种蛋封口后继续孵化从而得到的含人抑癌基因的转基因鸡。
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