[发明专利]一种基于多重PCR富集循环肿瘤DNA的方法和试剂盒有效
| 申请号： | 201910402310.9 | 申请日： | 2019-05-15 |
| 公开（公告）号： | CN110117574B | 公开（公告）日： | 2021-03-23 |
| 发明（设计）人： | 蔡微菁;徐泽 | 申请（专利权）人： | 常州桐树生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/09 | 分类号： | C12N5/09;C12Q1/686 |
| 代理公司： | 上海元好知识产权代理有限公司 31323 | 代理人： | 贾慧琴;刘琰 |
| 地址： | 213149 江苏省常州市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于多重PCR富集循环肿瘤DNA的方法和试剂盒，所述的方法包含：步骤(1)，设计若干PCR引物对，PCR引物包含：一段用于扩增基因目标区域的扩增引物序列、及一段引物连接序列；所述的引物连接序列用于与测序平台的通用测序接头连接；步骤(2)，取含有循环肿瘤DNA的模板，并将所述模板和步骤(1)所述的PCR引物对一起进行第一次PCR反应，获得第一次PCR反应产物；步骤(3)，在所述的第一次PCR反应产物中加入组合酶，以消化残留的PCR引物；步骤(4)，将通用测序接头加入到第一次PCR反应产物中，进行第二次PCR反应，以获得测序文库。本发明具有降低样本损失的效果。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 多重 pcr 富集 循环 肿瘤 dna 方法 试剂盒 | ||
【主权项】：
1.一种基于多重PCR富集循环肿瘤DNA的方法，其特征在于，包含以下步骤：步骤(1)，设计若干PCR引物对，PCR引物上带有U碱基，所述的PCR引物对包含正向引物和反向引物，所述的正向引物和反向引物均包含：一段用于扩增基因目标区域的扩增引物序列、及一段引物连接序列；所述的引物连接序列用于与测序平台的通用测序接头连接；步骤(2)，取含有循环肿瘤DNA的模板，并将所述模板和步骤(1)所述的PCR引物对一起进行第一次PCR反应，获得第一次PCR反应产物；步骤(3)，在所述的第一次PCR反应产物中加入组合酶，以消化残留的PCR引物；所述的组合酶包含：用于将所述的第一次PCR反应产物中的U碱基切除并降解单链DNA片段的第一类酶、以及用于将所述第一次PCR反应产物中的双链DNA上的U修复为T的第二类酶；步骤(4)，将通用测序接头加入到第一次PCR反应产物中，进行第二次PCR反应，以获得测序文库。
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