[发明专利]一种利用293细胞生产制备溶瘤病毒的方法在审
| 申请号： | 201910402363.0 | 申请日： | 2019-05-15 |
| 公开（公告）号： | CN110305850A | 公开（公告）日： | 2019-10-08 |
| 发明（设计）人： | 吴飞;韦治明;秦晓峰 | 申请（专利权）人： | 苏州奥特铭医药科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N7/00 | 分类号： | C12N7/00;A61P35/00;C12R1/93 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 215123 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了利用293贴壁细胞和293sus悬浮细胞生产制备溶瘤病毒的方法，该方法利用贴壁或者悬浮的293细胞制备溶瘤病毒，利用293贴壁细胞优化出病毒扩增产毒的最优条件，包括最优的病毒感染复数（MOI）、病毒稀释液、病毒扩增时血清浓度、病毒收获时间及病毒扩增温度等条件；进一步，通过优化293sus悬浮细胞制备溶瘤病毒的方法，包括优化病毒感染复数（MOI）、病毒收获时间等条件，单细胞产毒量达到E4次方。进一步在高细胞密度扩毒时，病毒产量能达到4E10pfu/mL。两种293细胞均能高效、稳定生产制备出高滴度的病毒，为后续病毒的规模化生产提供了技术支持。 | ||
| 搜索关键词： | 溶瘤病毒 制备 病毒 病毒感染复数 病毒扩增 病毒收获 贴壁细胞 悬浮细胞 优化 规模化生产 细胞 技术支持 稳定生产 细胞生产 细胞制备 最优条件 高滴度 稀释液 血清 毒量 贴壁 悬浮 增产 生产 | ||
【主权项】：
1.一种生产制备溶瘤病毒的方法，其方法包括：首先溶瘤病毒起始接毒量范围在MOI=0.01‑0.1，用DMEM‑0或opti‑MEM培养基作为病毒稀释液，稀释后在37℃感染293贴壁细胞2‑3h；然后吸弃病毒液，更换成含体积百分比为3‑10%FBS的DMEM完全培养基作为病毒扩增液，于37℃培养24h后收获病毒液，优选的将病毒按MOI=0.01‑0.1直接加入到含3%FBS的DMEM培养基中，然后加入到293生产细胞中，在37℃温度条件下感染24h后，收获培养上清液得到生产扩增后的病毒原液。
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