[发明专利]一种验证莱茵衣藻AANAT基因抗盐功能的方法及载体在审
| 申请号： | 201910406105.X | 申请日： | 2019-05-16 |
| 公开（公告）号： | CN110117611A | 公开（公告）日： | 2019-08-13 |
| 发明（设计）人： | 王英娟;冯政;高文英;贺瑾瑾;白庆庆 | 申请（专利权）人： | 西北大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N15/31 |
| 代理公司： | 西安维赛恩专利代理事务所(普通合伙) 61257 | 代理人： | 刘艳霞 |
| 地址： | 710069 *** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种验证莱茵衣藻AANAT基因抗盐功能的方法，步骤一、构建含目的基因AANAT的莱茵衣藻核表达载体pDBle‑aanat；步骤二、将步骤一中的核表达载体pDBle‑aanat导入莱茵衣藻细胞核基因组中，筛选获得AANAT基因沉默的转基因藻株；步骤三、选取野生莱茵衣藻和步骤二中所述的转基因藻株；将野生莱茵衣藻和转基因藻株分别在含有相同浓度NaCl的TAP培养液中培养，得藻液；步骤四、取部分各所述藻液，处理后，检测，确定转基因藻株的抗盐能力，验证莱茵衣藻AANAT基因抗盐功能。采用该方法为后期在莱茵衣藻中褪黑素研究提供了藻细胞材料，便于准确的研究AANAT基因与褪黑素合成之间的关系。 | ||
| 搜索关键词： | 莱茵衣藻 转基因藻 抗盐 基因 验证 核表达 黑素 藻液 培养液 细胞核基因组 基因沉默 目的基因 藻细胞 构建 合成 筛选 研究 检测 | ||
【主权项】：
1.一种验证莱茵衣藻AANAT基因抗盐功能的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：步骤一、构建含目的基因AANAT的莱茵衣藻核表达载体pDBle‑aanat；步骤二、将步骤一中的所述核表达载体pDBle‑aanat导入莱茵衣藻细胞核基因组中，筛选获得AANAT基因沉默的转基因藻株；步骤三、选取野生莱茵衣藻和步骤二中所述的转基因藻株；将所述野生莱茵衣藻和转基因藻株分别在含有相同浓度NaCl的TAP培养液中培养，得藻液；步骤四、取部分各所述藻液，处理后，放置于显微镜下观察莱茵衣藻细胞的形态，比较所述野生莱茵衣藻和转基因藻株的藻液，细胞数量减少和细胞萎缩的为转基因藻株的藻液；同时，MT含量降低的多的为转基因藻株。
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