[发明专利]诺卡氏菌感受态细胞的制备方法与诺卡氏菌基因编辑方法有效
| 申请号： | 201910409358.2 | 申请日： | 2019-05-16 |
| 公开（公告）号： | CN110129228B | 公开（公告）日： | 2023-06-06 |
| 发明（设计）人： | 夏立群;王文基;鲁义善;侯素莹;谭万春;陈建林 | 申请（专利权）人： | 广东海洋大学深圳研究院;广东海洋大学;深圳义海生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12N1/21;C12N15/74;C12R1/365 |
| 代理公司： | 北京超凡宏宇专利代理事务所(特殊普通合伙) 11463 | 代理人： | 肖丽 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市大*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明提供一种诺卡氏菌感受态细胞的制备方法与诺卡氏菌基因编辑方法。本发明的诺卡氏菌感受态细胞的制备方法采用溶菌酶对诺卡氏菌进行处理，从而降低了诺卡氏菌细胞壁的厚度，最终制备出容易接受外源DNA的诺卡氏菌感受态细胞，该方法操作简便快捷，具有较高的应用价值。本发明的诺卡氏菌基因编辑方法首次将CRISPR/Cas9系统运用到诺卡氏菌中，构建了CRISPR/Cas9基因编辑质粒并将其转化进入诺卡氏菌对目的基因进行编辑，该方法操作简便快捷，具有较高的应用价值，为研究诺卡氏菌基因功能、构建诺卡氏菌基因缺失株以及制备诺卡氏菌基因缺失株疫苗奠定了基础。 | ||
| 搜索关键词： | 诺卡氏菌 感受态 细胞 制备 方法 基因 编辑 | ||
【主权项】：
1.一种诺卡氏菌感受态细胞的制备方法，其特征在于，包括：取处于对数生长期的诺卡氏菌菌液于离心管中，第一次离心收集诺卡氏菌的菌体，采用无菌水或无菌水溶液洗涤所述菌体后，再采用无菌水或无菌水溶液第一次重悬所述菌体，然后在重悬的菌体中加入溶菌酶进行处理，处理后第二次离心收集诺卡氏菌的菌体，采用无菌水或无菌水溶液对所述菌体进行第二次重悬，得到诺卡氏菌感受态细胞。
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