[发明专利]一种长链DNA引物的HPLC纯化改进的方法

摘要

本发明公开了一种长链DNA引物的HPLC纯化改进的方法，包括如下步骤：第一步、在全自动DNA合成仪上合成DNA引物，自动脱去单体上的第一个碱基5’‑OH基团上的DMTr保护基；第二步、注入离子交换高效液相色谱系统进行粗检测；第三步、去除杂质短链DNA；第四步、脱除亚磷酰胺单体；第五步、进一步纯化处理；第六步、纯度检测。本发明通过将带DMT的DNA先进行HPLC纯化用以除去短片段，之后进行脱DMT步骤，然后进一步纯化，带DMT的DNA极性很弱，有很强的疏水性，不带DMT的短片断就能通过HPLC纯化被高效分离，然后对带DMT的目标分子量抽干后加10％的醋酸处理，使DMT完全脱除，处理后的引物继续进行HPLC纯化，可以得到高质量的DNA引物，纯度达到99％以上。

主权项

1.一种长链DNA引物的HPLC纯化改进的方法，其特征在于，包括如下步骤：第一步、首先在全自动DNA合成仪上合成DNA引物，自动脱去单体上的第一个碱基5’‑OH基团上的4,4'‑二甲氧基三苯甲基保护基，得到DNA合成粗产物；第二步、将上一步得到的DNA合成粗产物注入离子交换高效液相色谱系统，进行粗检测，确认主峰位置和目的DNA含量；第三步、增加注样量，回收主峰平头部分，去除杂质短链DNA，得到带亚磷酰胺单体的DNA引物；第四步、对带亚磷酰胺单体的DNA引物抽干后，置于振动处理器的反应框(1)内，再往里加入醋酸水溶液，于振动处理器内振荡处理20‑30min，脱除亚磷酰胺单体；第五步、将上一步脱除亚磷酰胺单体的DNA引物再次注入离子交换高效液相色谱系统进行进一步纯化处理；第六步、将上一步回收后的DNA进行纯度检测，确认纯度达到99％以上，完成纯化。