[发明专利]海藻糖生产用大肠杆菌的筛选和优化方法在审
| 申请号： | 201910427919.1 | 申请日： | 2019-05-22 |
| 公开（公告）号： | CN110157642A | 公开（公告）日： | 2019-08-23 |
| 发明（设计）人： | 任峰;宋金松;孙怀建;张虎;林加平 | 申请（专利权）人： | 德州汇洋生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12Q1/10;C12R1/19 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 253100 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种海藻糖生产用大肠杆菌的筛选和优化方法，包括步骤一、在发酵罐中接取噬菌体侵染的细菌液体培养基，并在抗性LB平板上涂布培养，剩余菌液在无菌条件下与细菌分离并收集上清液待用；步骤二、待平板长出透明圈后继续培养至透明圈中长出单菌落，将多个单菌落分别接种于装有LB液体培养基的试管中培养；步骤三、待试管中的细菌长至对数生长期后，按2％传代液体培养基培养，待菌浓达到OD600≥2时，接入终浓度为5％步骤一中的上清液；步骤四、将步骤三中能够继续正常生长的细菌对应的试管菌液按一定的接种量进行自诱导发酵验证，将转化实验验证转化率高的试管菌液液体培养基扩培冻存待用；这样既降低了生产成本，又达到了较好的转化效果。 | ||
| 搜索关键词： | 试管 菌液 大肠杆菌 液体培养基 单菌落 海藻糖 上清液 透明圈 发酵 细菌 细菌液体培养基 传代 筛选 对数生长期 实验验证 涂布培养 无菌条件 细菌分离 接种量 噬菌体 抗性 冻存 扩培 侵染 转化 生产成本 接种 优化 诱导 验证 生产 生长 | ||
【主权项】：
1.一种海藻糖生产用大肠杆菌的筛选和优化方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、在发酵罐中接取噬菌体侵染的细菌液体培养基，并在抗性LB平板上涂布培养，剩余菌液在无菌条件下与细菌分离并收集上清液待用；步骤二、待涂布培养的平板长出透明圈后继续培养至透明圈中长出单菌落，将多个单菌落分别接种于一一对应的且装有LB液体培养基的试管中培养；步骤三、待试管中的细菌长至对数生长期后，按2％传代液体培养基培养，待菌浓达到OD600≥2时，接入终浓度为5％步骤一中的上清液，继续培养观察；步骤四、将步骤三中能够继续正常生长的细菌对应的试管菌液按一定的接种量进行自诱导发酵验证，将转化实验验证转化率高的试管菌液液体培养基扩培冻存待用。
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