[发明专利]一种RFFT细胞的构建方法

摘要

本发明提供了一种RFFT细胞的构建方法，属于生物技术领域。该方法用于构建一种攻防一体、精准性高、杀伤性高的T细胞。该构建方法包括以下步骤：PBMC细胞负载致肿瘤突变的多肽，而后对负载多肽后的PBMC细胞进行多肽冲击；冲击后扩大培养，得到FF细胞；以致肿瘤突变的多肽作为抗原直接刺激该FF细胞以筛选精准多肽；培养PBMC细胞，在培养过程中，用精准多肽进行多肽冲击；冲击后继续培养，得到RFF细胞；筛选获得能够识别所述精准多肽的特异性细胞；由特异性细胞获取TCR基因；培养PBMC细胞，敲除原有的TCR基因，并转入前述所获取的TCR基因，制备得到RFFT细胞。该构建方法可用于构建用于细胞免疫治疗技术的细胞。

主权项

1.一种RFFT细胞的构建方法，所述RFFT细胞为一种用于细胞免疫治疗的T细胞，所述构建方法包括：S1)对肿瘤细胞进行全外显子测序；将全外显子测序结果与正常细胞的基因组相比，筛选出突变的氨基酸位点；以突变的氨基酸位点为中心预测抗原表位；采用多肽固相合成法合成突变多肽；PBMC细胞负载致肿瘤突变的多肽，而后对负载多肽后的PBMC细胞进行一次多肽冲击；S2)冲击后扩大培养，得到FF细胞；S3)以致肿瘤突变的多肽作为抗原直接刺激所述FF细胞以筛选精准多肽；S4)培养PBMC细胞，在培养过程中，用精准多肽进行多次多肽冲击；S5)冲击后继续培养，得到RFF细胞；S6)以精准多肽作为抗原刺激所得RFF细胞，筛选获得能够识别所述精准多肽的特异性细胞；S7)通过测序得到特异性细胞的TCRβ链CDR3区序列，由所述TCRβ链CDR3区序列扩增得到TCR基因；S8)敲除PBMC细胞中原有的TCR基因，并转入步骤S7中获得的能够与精准多肽特异性结合的TCR基因，培养得到RFFT细胞。