[发明专利]一种基于数字微滴PCR无创产前胎儿染色体非整倍体筛查方法在审
| 申请号： | 201910440068.4 | 申请日： | 2019-05-24 |
| 公开（公告）号： | CN110106235A | 公开（公告）日： | 2019-08-09 |
| 发明（设计）人： | 陈谦;刘弘扬;刘泓;贾海雪 | 申请（专利权）人： | 苏州索真生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 北京科家知识产权代理事务所(普通合伙) 11427 | 代理人： | 陈娟 |
| 地址： | 215163 江苏省苏州*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于数字微滴PCR无创产前胎儿染色体非整倍体筛查方法，包括以下步骤：采集孕妇血浆样本并分离出游离DNA；用去离子水洗脱游离DNA，形成待测染色体；将正常女性基因组DNA剪切成200bp的片段DNA，形成参照染色体；对待测染色体及参照染色体进行定量标记，形成靶标区域；在靶标区域内选择目标序列设计引物和探针；选择具有相同探针的引物对目标序列中潜在的二级结构进行筛选，形成靶向区域；通过PCR反应体系对靶向区域进行PCR扩增和结果定量分析；确定靶向区域中DNA分子的拷贝数；判断孕妇血浆样本中胎儿是否存在非整倍体染色体。有益效果：在保证准确率的同时，降低设备门槛。 | ||
| 搜索关键词： | 染色体 非整倍体 胎儿染色体 靶向区域 孕妇血浆 游离DNA 靶标 筛查 探针 微滴 无创 样本 序列设计引物 基因组DNA 定量分析 定量标记 二级结构 降低设备 目标序列 选择目标 正常女性 剪切 拷贝数 潜在的 水洗脱 准确率 对靶 引物 胎儿 离子 采集 门槛 筛选 保证 | ||
【主权项】：
1.一种基于数字微滴PCR无创产前胎儿染色体非整倍体筛查方法，其特征在于，包括以下步骤：采集孕妇血浆样本，并从中分离出游离DNA；采用预先准备好的去离子水洗脱所述游离DNA，形成待测染色体，并放置在‑80℃下保存备用；将预先制备的正常女性基因组DNA剪切成200bp的片段DNA，形成参照染色体；使用荧光计对所述待测染色体及所述参照染色体进行定量标记，形成靶标区域；在所述靶标区域内选择目标序列设计引物和探针；选择具有相同探针的引物对所述目标序列中潜在的二级结构进行筛选，形成靶向区域；通过预先配置的PCR反应体系对靶向区域进行微滴式数字PCR扩增和结果定量分析；读取并分析每滴液滴中FAM和VIC荧光强度，确定所述靶向区域中DNA分子的拷贝数；根据所述靶向区域中DNA分子的拷贝数，判断孕妇血浆样本中胎儿是否存在非整倍体染色体。
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