[发明专利]一种LRFF细胞的构建方法

摘要

本发明使用患者外周血进行ctDNA测序或肿瘤组织进行全外显子测序，筛选出突变位点进行抗原表位预测，连接并合成突变多肽表达基因序列；同时构建慢病毒载体，包装慢病毒，转染APC细胞，完成特异性LV细胞的改造，体外与从外周血中分离的PBMC共培养，筛选出有效的精准多肽，通过精准多肽刺激的第二次冲击，将普通T细胞改造成为具有更精准杀伤能力的LRFF细胞，提高了T细胞对肿瘤细胞的杀伤力。发明提供的LRFF细胞可广泛应用于个体化精准治疗实体肿瘤。

主权项

1.一种LRFF细胞的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括如下步骤：1)通过测序肿瘤细胞筛选出突变位点，以突变的氨基酸位点为中心，向两侧各延伸8个氨基酸，将这段17个氨基酸的多肽作为潜在抗原表位，使用预测软件分析潜在抗原表位的IC50，如IC50＜1000nM则认为此潜在抗原表位为抗原表位；2)使用上步软件分析任意抗原表位两两相连后接头处的IC50，IC50≥1000nM时认为是弱免疫原性，将弱免疫原性的抗原表位连接在一起，合成连接后的突变多肽的基因序列；3)构建表达突变多肽的慢病毒载体，包装慢病毒；4)使用所述慢病毒转染抗原递呈细胞并与PBMC共培养，获得LFF细胞；5)所述突变多肽作为抗原刺激所述LFF细胞，通过检测IFN‑γ的分泌，筛选出有效的精准多肽；6)以所述精准多肽作为抗原再次刺激所述LFF细胞，以流式细胞仪进行分选，筛选出能够识别所述精准多肽的特异性细胞，即得LRFF细胞。