[发明专利]一种嗜热淀粉分支酶诱导发酵的生产方法

摘要

本发明涉及一种嗜热淀粉分支酶诱导发酵的生产方法，该方法包括以下步骤：⑴菌种活化：将购买的三种嗜热脂肪芽胞杆菌冷冻干燥菌粉分别培养，分别得到三种活化的嗜热脂肪芽胞杆菌；⑵菌种保藏：将三种活化的嗜热脂肪芽胞杆菌分别培养，分别得到三种斜面菌种；⑶菌种试管培养：将三种斜面菌种分别培养，分别得到试管种子菌种BTS‑Ⅰ、BTS‑Ⅱ、BTS‑Ⅲ；⑷三角瓶种子培养：将BTS‑Ⅰ、BTS‑Ⅱ、BTS‑Ⅲ试管种子菌种分别培养，分别得到三种摇瓶种子菌种；⑸淀粉分支酶的液体发酵；⑹淀粉分支酶分离制备；⑺淀粉分支酶冻干；⑻淀粉分支酶纯化，即得纯化的淀粉分支酶。本发明诱导筛选的菌种生长稳定，发酵生产的淀粉分支酶活力高、嗜热性能好，可在高温中保持较高的酶活性。

主权项

1.一种嗜热淀粉分支酶诱导发酵的生产方法，包括以下步骤：⑴菌种活化：将购买的嗜热脂肪芽胞杆菌Ⅰ、嗜热脂肪芽胞杆菌Ⅱ、嗜热脂肪芽胞杆菌Ⅲ冷冻干燥菌粉按20mg~50 mg/8~10mL分别接种于牛肉浸膏液体培养基中，三种菌分别于45 ℃、50 ℃、55 ℃恒温摇床中，以150 r/min的转速培养72 h，分别得到活化的嗜热脂肪芽胞杆菌Ⅰ、活化的嗜热脂肪芽胞杆菌Ⅱ、活化的嗜热脂肪芽胞杆菌Ⅲ；⑵菌种保藏：将所述活化的嗜热脂肪芽胞杆菌Ⅰ、活化的嗜热脂肪芽胞杆菌Ⅱ、活化的嗜热脂肪芽胞杆菌Ⅲ使用接种环按0.1~0.2mL/8~10mL分别接种于牛肉浸膏琼脂糖培养基中，分别于45 ℃、50 ℃、55 ℃恒温培养72 h，当菌落均匀长满斜面后，于冰箱0℃~4℃过夜后，再于‑18℃冷冻保藏，分别得到三种嗜热脂肪芽胞杆菌保藏的斜面菌种；⑶菌种试管培养：将所述三种嗜热脂肪芽胞杆菌保藏的斜面菌种使用接种环按2~3环/8~10mL分别接种于种子试管培养基中，分别于45 ℃、50 ℃、55 ℃恒温培养72 h，分别得到三种试管种子菌种，于0 ℃~4℃保藏备用；其中：嗜热脂肪芽胞杆菌Ⅰ选育分离后的菌种编号为BTS‑Ⅰ、嗜热脂肪芽胞杆菌Ⅱ选育分离后的菌种编号为BTS‑Ⅱ、嗜热脂肪芽胞杆菌Ⅲ选育分离后的菌种编号为BTS‑Ⅲ；⑷三角瓶种子培养：将所述BTS‑Ⅰ试管种子菌种、BTS‑Ⅱ试管种子菌种、BTS‑Ⅲ试管种子菌种按5%~10%的接种比例分别接种于摇瓶发酵培养基中，在摇床为转速150 r/min的条件下分别于45℃、50℃、55℃恒温培养72 h，分别得到BTS‑Ⅰ摇瓶种子菌种、BTS‑Ⅱ摇瓶种子菌种、BTS‑Ⅲ摇瓶种子菌种，于0 ℃~4℃保藏备用；⑸淀粉分支酶的液体发酵：在5L发酵罐中装入4L发酵培养基，121℃灭菌20min，冷却至45℃；然后将所述BTS‑Ⅰ摇瓶种子菌种或所述BTS‑Ⅱ摇瓶种子菌种或所述BTS‑Ⅲ摇瓶种子菌种按5%~10%的接种比例接种于装有4L发酵培养基容量为5L的发酵罐中发酵培养，得到发酵种子菌种；在100L发酵罐中装入60L发酵培养基，121℃灭菌20min，冷却至45℃；将所述发酵种子菌种按5%~10%的接种比例接种其中进行扩大培养，即得淀粉分支酶发酵液；⑹淀粉分支酶分离制备：所述淀粉分支酶发酵液经膜浓缩后离心，得浓缩分支酶；⑺淀粉分支酶冻干：所述浓缩分支酶经冷冻干燥、粉粹、过60目筛，即得冻干分支酶产品；⑻淀粉分支酶纯化：所述浓缩分支酶样品经硫酸铵盐析、柱层析分离，即得纯化的淀粉分支酶。