[发明专利]一种龙葵离体快速繁殖方法

摘要

一种龙葵离体快速繁殖方法，属于植物组织培养领域，本发明以龙葵种子为试验材料建立无菌系，选取无菌苗的子叶和下胚轴为外植体，以MS为基本培养基，添加植物生长调节剂6‑BA、NAA或IAA诱导愈伤组织，再经分化培养、生根培养及炼苗移栽等过程在短时间内成功获得大量再生植株，建立龙葵组织培养快速繁殖技术体系，推动其规模化发展。本发明的优点是：本发明以龙葵种子为试验材料，通过愈伤组织诱导培养、分化培养、生根培养、炼苗移栽等过程成功获得了龙葵离体再生植株，建立龙葵组织培养快速繁殖技术体系，为龙葵有效成分的提取提供遗传性能稳定且具有较高整齐度的无菌幼苗。

主权项

1.一种龙葵离体快速繁殖方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：步骤一：无菌系的建立：选择果实饱满的龙葵种子作为外植体，首先使用无菌水浸泡龙葵种子24 h，期间更换3次无菌水，然后在无菌条件下先用体积分数为75%的酒精浸泡30 s，用无菌水清洗4次，再用体积分数为10%的NaClO溶液浸泡龙葵种子10 min，最后再用无菌水清洗4次，将龙葵种子接种于MS培养基上，置于1000 lx~2000 lx光照强度下光照16 h，在培养温度20℃，空气相对湿度为70%~80%的条件下对龙葵种子进行培养，至株高为5 cm时进行愈伤组织培养；步骤二：愈伤组织诱导：将步骤一获得的无菌苗的子叶和下胚轴作为外植体，进行脱分化培养，其中，子叶直接切取，下胚轴切取1 cm长度，将子叶的背面朝下、下胚轴切口向下接种到诱导培养基进行愈伤组织诱导培养，接种后置于1000 lx~2000 lx光照强度下光照10 h，在培养温度20℃，空气相对湿度为70%~80%的条件下培养15天；步骤三：分化培养：将步骤二获得的愈伤组织取出切成边长大小为0.5 cm的小块接种至分化培养基进行分化培养，接种后置于1000 lx~2000 lx光照强度下光照16 h，在培养温度20℃，空气相对湿度为70%~80%的条件下培养20天，得到试管苗；步骤四：生根培养：从基部切取步骤三分化培养获得的试管苗接种至生根培养基中进行诱导生根，接种后置于1000 lx~2000 lx光照强度下光照10 h，在培养温度20℃，空气相对湿度为70%~80%的条件下培养21天，得到瓶苗；步骤五：炼苗移栽：将生根培养基上获得的具备移栽条件的瓶苗进行炼苗，瓶苗移至常温下4~5天后，打开封口膜2~3天，然后用清水洗净根部残留的培养基，移栽到已消毒的含有细沙的基质中，移栽前用体积分数为5‰的高锰酸钾溶液对基质喷淋消毒，然后再用清水冲淋3~5遍，移栽时需将基质压实，并进行单株移植，早晚喷雾，保证生长环境潮湿。