[发明专利]基于胶束介质处理的马齿苋多糖及总黄酮联合提取方法

摘要

本发明提供一种高效的马齿苋高纯多糖及总黄酮联合提取方法，涉及提取液脱蛋白、脱色素方法，其可以大批量地从马齿苋中高效快速地联合提取马齿苋多糖及总黄酮，并采用特定胶束介质萃取单步操作联合脱除多糖提取步骤中的蛋白及色素组分，避免了现有技术中马齿苋多糖提纯时脱蛋白、除色素需独立进行的弊端，缩短了提取流程，适合大批量提取。

主权项

1.一种马齿苋多糖及总黄酮联合提取方法，其包括在多糖提取操作中采用胶束介质萃取处理的步骤，其中胶束介质萃取溶液由十六烷基三甲基溴化铵溶于庚烷、体积分数为50％的丁醇水溶液组成的混合溶剂中得到；其特征在于，所述方法包括以下步骤：步骤(1)：对马齿苋进行脱脂处理；步骤(2)：对脱脂处理液进行除脂，用大孔吸附树脂柱进行梯度洗脱提取马齿苋总黄酮，分别收集含黄酮洗脱液和不含黄酮洗脱液；步骤(3)：从脱脂马齿苋提取粗多糖，过程如下：S1：将脱脂处理过的马齿苋粉末与去离子水混合，在115‑121℃下高温处理1‑2h，然后超声提取2‑3次，过滤，合并提取液；S2：初步浓缩：将提取液与上述树脂洗脱步骤收集的不含黄酮的洗脱液混合合并，在蒸发器中蒸发浓缩至50％体积以下，得到初步浓缩液；S3：将初步浓缩液高速离心，收集上清液，旋蒸浓缩，4℃下将浓缩滤液用95％乙醇或无水乙醇进行醇沉，得到粗多糖沉淀，依次用无水乙醇、丙酮淋洗沉淀，干燥得到马齿苋粗多糖；步骤(4)：配制胶束介质萃取液，对酶解后的粗多糖溶液进行盐化、萃取双脱处理，过程如下：S1：配制胶束介质萃取液：取适量十六烷基三甲基溴化铵溶于庚烷、50％丁醇混合溶剂中，充分混匀，得到胶束介质萃取液，其中十六烷基三甲基溴化铵在溶液中的质量分数为3‑10％；优选地，十六烷基三甲基溴化铵质量分数为3‑5％；S2：将马齿苋粗多糖溶于蒸馏水配制成粗多糖溶液，加入蛋白水解酶进行酶解2‑4h，灭酶，冷却至室温；向酶解液加入NaCl至质量分数3‑5％，混匀，进行盐化；S3：向酶解液中加入胶束介质萃取液，剧烈震荡萃取10‑15min，然后高速离心分层，得到脱蛋白、色素等杂质的多糖提取液；步骤(5)：萃取液进行透析除杂，去除小分子杂质：将上述经过双脱萃取处理的多糖溶液进行蒸发浓缩，然后在截留分子量为1‑5 KD的透析袋中用蒸馏水透析除盐及小分子杂质，得到透析处理的多糖溶液；步骤(6)：蒸发浓缩析晶，降温至0‑5℃继续结晶，将晶体用无水乙醇洗涤，从而得到纯化马齿苋多糖。