[发明专利]一种抗肿瘤补骨脂多糖及其提取分离方法和在制备抗肿瘤药物方面的应用

摘要

本发明涉及一种抗肿瘤补骨脂多糖的制备方法，具体为：1）补骨脂粉碎，依次用石油醚、70±5%乙醇室温浸提，超纯水加热提取，滤液经浓缩、醇沉得补骨脂粗多糖；2）将补骨脂粗多糖采用Sevag法脱蛋白，将得到的上清液减压浓缩、醇沉，取沉淀物干燥，即得脱蛋白的补骨脂粗多糖；3）取脱蛋白的补骨脂粗多糖，用DEAE‑52纤维素色谱柱纯化，依次用超纯水、0.05、0.1、0.2、0.3mol/L NaCl溶液进行梯度洗脱，蒸馏水的洗脱峰为组分PC‑1，0.2 mol/L NaCl溶液的洗脱峰为组分PC‑4；4）组分PC‑1、PC‑4分别经Sephadex G‑100葡聚糖凝胶柱色谱纯化得到的多糖组分命名为PCp‑1、PCp‑4；PCp‑1和/或PCp‑4即为抗肿瘤补骨脂多糖。经试验发现：该补骨脂多糖能有效抑制A549细胞的活性，可用于制备抗肿瘤尤其是抗肺癌药物。

主权项

1.一种抗肿瘤补骨脂多糖的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1）制备粗多糖：补骨脂粉碎，先用石油醚室温浸提脱脂，残渣挥干石油醚，再用70±5%乙醇室温浸提，残渣挥发至无乙醇味，然后用超纯水于85±5℃加热提取，提取结束后趁热抽滤，滤液浓缩获得浓缩液，然后向浓缩液中加入无水乙醇使终浓度为70‑75%，静置，收集沉淀，即得补骨脂粗多糖；2）制备脱蛋白的补骨脂粗多糖：将补骨脂粗多糖用超纯水完全溶解获得补骨脂粗多糖溶液，采用Sevag法脱蛋白，将得到的上清液减压浓缩后加入无水乙醇至终浓度为75±2%，静置，离心，取沉淀物，干燥，即得脱蛋白的补骨脂粗多糖；3）取脱蛋白的补骨脂粗多糖，超纯水溶解，离心除去不溶物，然后上样到DEAE‑52纤维素色谱柱，依次用超纯水、0.05、0.1、0.2、0.3mol/L NaCl溶液进行梯度洗脱，洗脱液采用苯酚‑硫酸法进行检测，测定490 nm处的吸光度，以洗脱管数为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制多糖洗脱曲线，合并同一洗脱峰的多糖样品、浓缩，透析、冷冻干燥；其中，蒸馏水的洗脱峰为组分PC‑1，0.2 mol/L NaCl溶液的洗脱峰为组分PC‑4；4）组分PC‑1用超纯水溶解，上样到Sephadex G‑100葡聚糖凝胶柱色谱，用超纯水洗脱，采用苯酚‑硫酸法进行检测，测定490 nm处的吸光度，以洗脱管数为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制多糖洗脱曲线，合并同一洗脱峰的多糖样品，浓缩、透析、冷冻干燥后得到的多糖组分命名为PCp‑1；组分PC‑4采用与组分PC‑1相同的方法进行洗脱，合并同一洗脱峰的多糖样品，浓缩、透析、冷冻干燥后得到的多糖组分命名为PCp‑4；PCp‑1和/或PCp‑4即为抗肿瘤补骨脂多糖。