[发明专利]一种高效筛选鸭肝炎病毒毒种的方法

摘要

本发明属于病毒筛选技术领域，公开了一种高效筛选鸭肝炎病毒毒种的方法，包括以下步骤：收集并处理病死鸭的肝脏病料；将肝脏病料接种于SPF鸭胚，收获死亡鸭胚液及胚体，传代培养得到待筛选的鸭肝炎病毒毒株；将上述毒株稀释后接种于SPF鸭胚，筛选出第一轮病毒毒株；用第一轮病毒毒株制备雏鸭毒，将雏鸭毒稀释后接种于雏鸭，筛选出第二轮病毒毒株；用第二轮病毒毒株制备灭火疫苗，免疫SPF鸡，筛选出第三轮病毒毒株；用第三轮病毒毒株制备的阳性血清注射于所述发病鸭场内的发病鸭，最终确定鸭肝炎病毒毒种。该方法可高效地筛选出优质的鸭肝炎病毒毒种，能够缩短疫苗产品的更新换代的时间，为市场上鸭病毒性肝炎的流行提供及时有效的治疗产品。

主权项

1.一种高效筛选鸭肝炎病毒毒种的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：收集并处理多个地区病死鸭的肝脏病料；步骤2：将步骤1获得的肝脏病料经尿囊腔接种于SPF鸭胚，收获死亡鸭胚液及胚体，进行连续传代培养，得到待筛选的鸭肝炎病毒毒株；步骤3：将步骤2获得的待筛选的鸭肝炎病毒毒株进行系列稀释后经尿囊腔接种于SPF鸭胚，统计死鸭胚数量，根据计算的鸭胚半数致死量ELD₅₀，筛选48~120h死亡率大于80%、且病毒含量大于10^5.5ELD₅₀/0.1mL的鸭肝炎病毒毒株为第一轮鸭肝炎病毒毒株；步骤4：用步骤3筛选出的第一轮鸭肝炎病毒毒株制备雏鸭毒，将雏鸭毒进行系列稀释后接种于雏鸭，统计雏鸭死亡数量，根据计算的雏鸭半数致死量LD₅₀，筛选死亡率大于80%、且病毒含量大于10^6.0LD₅₀/0.2mL的鸭肝炎病毒毒株为第二轮鸭肝炎病毒毒株；步骤5：用步骤4筛选出的第二轮鸭肝炎病毒毒株制备灭火疫苗，免疫SPF鸡，根据计算的三免后血清抗体中和效价，筛选三免后血清抗体中和效价大于1:4096的鸭肝炎病毒毒株为第三轮鸭肝炎病毒毒株；步骤6：选取5个以上地区的发病鸭场，将步骤4筛选出的第三轮鸭肝炎病毒毒株制备的阳性血清注射于所述发病鸭场内的发病鸭，统计阳性血清对每个地区的保护率，将对每个地区保护率均不小于80%的鸭肝炎病毒毒株确定为鸭肝炎病毒毒种。