[发明专利]一种以杜鹃兰组培根为外植体快速诱导杜鹃兰再生植株的方法

摘要

本发明公开了一种以杜鹃兰组培根为外植体快速诱导杜鹃兰再生植株的方法，该方法包括如下步骤：组培根预培养→类原球茎诱导培养→类原球茎增殖培养→类原球茎上幼芽的诱导培养→再生植株快速培育。本发明以杜鹃兰组培根为外植体诱导类原球茎，进一步在类原球茎上诱导幼芽，再将带幼芽的类原球茎直接移载形成再生植株，可大大缩短杜鹃兰种苗的培养时间，为杜鹃兰大规模繁殖提供了一种新途径，有效地解决了当前杜鹃兰植物资源和药材资源短缺的问题。

主权项

1.一种以杜鹃兰组培根为外植体快速诱导杜鹃兰再生植株的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)组培根预培养：切取杜鹃兰组培苗上长度为3.0～5.0cm的幼根，接入B5+IBA 0.1～0.3mg/L+2,4‑D 0.1～0.3mg/L+核黄素5～15mg/L+活性炭1.0～2.0g/L+土豆泥20～40g/L+蔗糖10～30g/L培养基中，在温度15～22℃、每天光照15～24小时，光照强度为1500～2500lx的条件下进行预培养，组培根产生明显膨大；(2)类原球茎诱导培养：选取步骤(1)中膨大直径为1.5～2.5mm的组培根，切除其根冠后，将去除根冠的组培根接入B5+TDZ 1.0～3.0mg/L+NAA2.0～4.0mg/L+IBA 1.0～3.0mg/L+2,4‑D 1.0～3.0mg/L+壳聚糖10～20mg/L+活性炭0.2～0.4g/L+土豆泥10～30g/L+蔗糖10～30g/L培养基中，在温度15～22℃、每天光照15～24小时，光照强度为100～800lx的条件下进行类原球茎诱导培养；(3)类原球茎增殖培养：切取步骤(2)中产生的颜色为乳白色的类原球茎转入B5+6‑BA 0.3～0.5mg/L+NAA 1.0～3.0mg/L+2,4‑D 1.0～2.0mg/L+活性炭0.3～0.5g/L+土豆泥20～40g/L+头孢曲松钠300～500mg/L+蔗糖20～40g/L培养基中，在温度为22～26℃、每天光照10～14小时、光照强度为2000～3000lx的条件下进行增殖培养；(4)类原球茎上幼芽的诱导培养：将步骤(3)中产生的类原球茎切割成质量为1.0～1.5g的块状，转入改良MS+TDZ 2.0～4.0mg/L+IAA 0.2～0.4mg/L+IBA 0.1～0.3mg/L+活性炭0.5～1.0g/L+燕麦浆10～20g/L+蔗糖10～30g/L培养基中，在温度为22～26℃、每天光照18～24小时、光照强度为2000～3000lx的条件下进行类原球茎上幼芽的诱导培养，所述燕麦浆由发芽10～20天的燕麦破碎成浆制成；(5)再生植株快速培育：选取步骤(4)中幼芽生长长度为2.0～3.0cm的类原球茎，洗去表面培养基后，放入激素配比为IBA 0.2～0.4mg/L+IAA0.1～0.3mg/L的液体中浸泡30～60min，取出阴干表面水分以后，移栽至消毒基质中培养，每培养5～8天喷洒一次营养液；上述所有培养基的pH值为5.5～6.2、琼脂6.5～7.0g/L。