[发明专利]一种从阿胶中快速提取DNA的优化方法

摘要

本发明公开了一种从阿胶中快速提取DNA的优化方法。本方法使用DNA纯化柱代替酚、氯仿等有毒的有机溶剂，并经过数次优化，确定了提取阿胶中驴源性基因组DNA的最适条件，有效去除阿胶中的蛋白质成分，最高效率的从深加工的阿胶及阿胶制品中提取出严重降解的DNA。本方法所需试剂安全无毒害，操作简单、省时，可在90min内完成阿胶基因组DNA提取，经聚合酶链式反应、2％琼脂糖凝胶电泳后在78bp处出现特异性条带，克隆测序比对后，与GenBank中已登记的驴物种相似性为100％。本方法提取的DNA纯度高、浓度大，解决了阿胶及阿胶制品DNA难以提取的问题，为分子生物学鉴定提供了关键的技术支持。

主权项

1.一种从阿胶中快速提取DNA的优化方法，包括以下步骤：(1)样本前处理取固体阿胶样本经过两侧紫外光照射20‑30min，消除表面可能存在的污染。使用垂直式多功能粉碎机将其研磨成粉，分装保存；(2)阿胶DNA提取①取粉碎后阿胶样品0.200g左右，置1.5ml离心管中，加入P1(裂解液、0.5mol/L EDTA、20mg/ml PK酶和10mg/ml RNA酶)消化液275μl，加入P2(1mol/L Tris‑HCl、0.5mol/L EDTA、NaCl、10％SDS和20mg/ml PK酶)裂解液250μl，使用枪头仔细混匀，在56℃水浴1h；②充分混匀后，短离心，于70℃水浴10min；③加入DNA纯化柱中，10000rpm/min离心3min；④弃去过滤液，加入P3(5mol/L乙酸钾、1mol/L Tris‑HCl、0.5mol/L EDTA、无水乙醇和ddH₂O)洗脱液700μl，10000rpm/min离心1min，重复洗脱一次；⑤弃去过滤液，10000rpm/min离心2min；⑥将DNA纯化柱转移入另一1.5ml离心管中，加入TE 50μl，室温放置15min后，10000rpm/min离心2min，将离心得到的溶液重新过柱，即得DNA溶液，于‑20℃保存。