[发明专利]一种应用脐带间充质干细胞预防肝癌发生和生长的实验方法

摘要

本发明涉及一种应用脐带间充质干细胞预防肝癌发生和生长的实验方法，首次提供了脐带间充质干细胞预防肝癌发生和生长的应用，提供了UC‑MSCs细胞制剂方法并提供了UC‑MSCs细胞有效预防肝癌的剂量1×10⁴cells/疗程和给药方法的实验数据，先移植UC‑MSCs制剂，然后植入肝癌细胞，观察并比较NOD/SCID小鼠肿瘤生长情况，从而证明脐带间充质干细胞能够起到预防肝癌发生和发展的方法以及UC‑MSCs的使用剂量，最大限度的利用了UC‑MSCs在生物体内成体器官组织的自我更新和损伤修复功能，从而提高机体免疫力，预防肝癌的发生，有利于其在后期研究和临床应用中发挥更明显稳定的作用。

主权项

1.一种应用脐带间充质干细胞预防肝癌发生和生长的实验方法，其特征在于：具体实验步骤如下：(1)选择NOD/SCID小鼠，随机将其分成生理盐水组、UC‑MSCs低剂量组和UC‑MSCs高剂量组；(2)选择肝癌细胞HepG2：实验前对HepG2细胞进行慢病毒转染，使其带RFP+Luciferse红色荧光标记，转染后使用1‑2μg/mL嘌呤霉素进行筛选，直至纯度达到90％以上，对稳转的HepG2细胞扩增并冻存备用；(3)采集目标：采集足月剖宫产胎儿脐带，采集后6小时内在生物安全柜中分离传代；(4)培养至P3进行细胞制剂；(5)UC‑MSCs表面呈现CD14、CD90、CD105高表达，CD19、CD34、CD45不表达或低表达，制剂后通过流式细胞仪对UC‑MSCs进行检测；(6)根据组别通过尾静脉对NOD/SCID小鼠进行细胞制剂的注射；(7)预防停止后1周，在NOD/SCID小鼠右腋皮下移植稳定表达RFP+Luciferse的HepG2细胞，每只5×10⁶cells；(8)每周通过小动物活体成像系统监测NOD/SCID小鼠肿瘤生长情况，并每周使用游标卡尺测量肿瘤大小计算体积；(9)HepG2细胞生长较慢，在NOD/SCID小鼠体内需生长35天之后对其进行取材，对瘤体称重比较；(10)IFN‑γ可通过促进HepG2细胞凋亡和细胞周期阻滞抑制肝癌细胞生长，TNF‑α对肝癌的发生、发展发挥一定的抑制作用，因此，取材后研磨脾脏取上清，进行ELISA检测比较IFN‑γ和TNF‑α炎性因子浓度，鉴定实验效果。