[发明专利]细胞纤连蛋白的制备及修复真皮组织的方法

摘要

一种细胞纤连蛋白的制备及修复真皮组织的方法，它包含如下步骤：一、耳后皮肤组织的选择；二、提取耳后皮肤；三、细胞纤连蛋白的制备；四、细胞纤连蛋白的富集；五、真皮组织的修复；本发明所述的细胞纤连蛋白的制备及修复真皮组织的方法，采用自体细胞，无免疫原性反应风险，活性高、效果明显，能有效利用自体组织，且制备成本低廉、可操作性强，突破皮肤吸收屏障，细胞纤连蛋白深度导入到皮下组织部位，迅速被肌肤组织吸收，发挥填充、嫩肤和修复皮肤作用，从而产生疗效；还能够准确地直接到达真皮层，同时又几乎没有创伤，具有准确、安全、高效、适应证广、并发症无等优点。

主权项

1.细胞纤连蛋白的制备及修复真皮组织的方法，其特征在于它包含如下步骤：一、耳后皮肤组织的选择：选择18‑45岁健康人士，男女均可，首先体检，采集其外周血，用ELASA方法检测乙肝、丙肝、梅毒、艾滋、EB病毒、嗜热T细胞病毒，为阴性即为合格；二、提取耳后皮肤：用手术刀或者打孔的方法提取体检合格人士耳后0.8*0.5cm的耳后皮肤，立即压迫止血，贴上创可贴；将皮肤组织迅速放到含有庆大霉素的PBS缓冲液皮肤保存液中；三、细胞纤连蛋白的制备：在cGMP制备层流室中用眼科剪将耳后皮肤组织剪碎，再将剪碎的耳后皮肤组织放到50毫升离心管中，加入10毫升的3mg/ml的胶原蛋白酶I和5毫升的0.25％胰酶消化180分钟，加入血清的DMEM/F12培养基终止消化，进行离心，弃掉上清，在细胞沉淀中加入20毫升无血清细胞培养基进行培养，每5天换液，第15‑20天，观察到梭形细胞长出，且7‑8个克隆的时候可以传代、冻存；梭形细胞的边缘细长拉丝处就是外分泌的细胞纤连蛋白；四、细胞纤连蛋白的富集：取对数期细胞，2000转离心，取上清I，然后在37℃和‑80℃中，反复冻融裂解，10000转离心10分钟，去除沉淀，取上清II，上清I和上清II按照2:1的比例混合，在‑80℃冷冻储存，真皮修复使用时室温融化3分钟即可；五、真皮组织的修复：洁面后敷医用麻膏30min，然后去除麻膏，医用碘伏消毒，PBS脱碘，采用0.8‑1.2mm深度水光针将细胞纤连蛋白导入，及时用干棉签压迫；医用冷敷贴敷面15分钟，修复真皮组织。